| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| ABBREVIATION | 第6-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-28页 |
| 1 表观遗传学 | 第12-22页 |
| 1.1 表观遗传学定义及研究范围 | 第12-16页 |
| 1.1.1 表观遗传学的定义及特点 | 第12页 |
| 1.1.2 表观遗传学研究的主要机制 | 第12-16页 |
| 1.2 组蛋白的共价修饰 | 第16-22页 |
| 1.2.1 组蛋白乙酰化修饰 | 第17页 |
| 1.2.2 组蛋白甲基化修饰 | 第17-18页 |
| 1.2.3 组蛋白磷酸化修饰 | 第18页 |
| 1.2.4 组蛋白泛素化修饰 | 第18-22页 |
| 1.3 组蛋白H2A去泛素化酶Ubp-M | 第22页 |
| 2 细胞周期及调控研究 | 第22-28页 |
| 2.1 细胞周期概述 | 第22-23页 |
| 2.2 细胞周期调控 | 第23-26页 |
| 2.2.1 CDK激酶对于细胞周期的调控 | 第23-24页 |
| 2.2.2 CDK激酶底物 | 第24-25页 |
| 2.2.3 细胞周期中的限制点和检验点调控 | 第25-26页 |
| 2.3 CDK1主要功能与表观遗传修饰 | 第26-28页 |
| 第二部分 研究论文 | 第28-62页 |
| 引言 | 第28-29页 |
| 材料与方法 | 第29-42页 |
| 1 实验材料 | 第29-30页 |
| 1.1 细胞材料 | 第29页 |
| 1.2 菌株和载体 | 第29页 |
| 1.3 酶及各种分子生物学试剂 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-42页 |
| 2.1 真核细胞蛋白纯化 | 第30-31页 |
| 2.1.1 杆状病毒载体的构建 | 第30页 |
| 2.1.2 sf9细胞培养 | 第30页 |
| 2.1.3 蛋白纯化过程 | 第30-31页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第31页 |
| 2.2 质谱分析实验 | 第31-32页 |
| 2.3 药物处理实验 | 第32页 |
| 2.3.1 小牛肠碱性磷酸酶CIP处理 | 第32页 |
| 2.3.2 CDKI抑制剂CGP74514A和Roscovitine的处理 | 第32页 |
| 2.3.3 细胞同步化Double Thymidine Block | 第32页 |
| 2.3.4 Ubp-M亚细胞定位LMB处理 | 第32页 |
| 2.4 GST复合蛋白纯化 | 第32-34页 |
| 2.4.1 质粒转化表达菌株 | 第32-33页 |
| 2.4.2 GST复合蛋白诱导表达 | 第33-34页 |
| 2.5 去泛素化酶活性实验 | 第34-35页 |
| 2.5.1 核小体蛋白的制备 | 第34页 |
| 2.5.2 组蛋白去泛素化酶活性实验 | 第34-35页 |
| 2.6 Western Blot实验 | 第35页 |
| 2.7 转染Transfection | 第35-36页 |
| 2.8 慢病毒侵染实验 | 第36-37页 |
| 2.8.1 质粒中提准备 | 第36-37页 |
| 2.8.2 侵染过程 | 第37页 |
| 2.9 RT-PCR实验 | 第37-39页 |
| 2.9.1 RNA抽提 | 第37-38页 |
| 2.9.2 反转录 | 第38页 |
| 2.9.3 qPCR实验 | 第38-39页 |
| 2.10 免疫荧光实验 | 第39-40页 |
| 2.11 免疫共沉淀 | 第40页 |
| 2.11.1 蛋白提取 | 第40页 |
| 2.11.2 FLAG-IP流程 | 第40页 |
| 2.12 FACS细胞准备 | 第40-42页 |
| 2.12.1 细胞培养准备 | 第40页 |
| 2.12.2 细胞固定 | 第40-41页 |
| 2.12.3 细胞染色 | 第41-42页 |
| 结果与分析 | 第42-57页 |
| 1 Ubp-M磷酸化位点分析 | 第42-44页 |
| 1.1 Ubp-M主要的磷酸化位点是第552位丝氨酸 | 第42-44页 |
| 2 Ubp-M能够被CDK1磷酸化 | 第44-47页 |
| 2.1 CDK1催化Ubp-M S552P | 第44-47页 |
| 3 Ubp-M S552P的功能研究 | 第47-57页 |
| 3.1 S552P对于Ubp-M去泛素化酶活性和基因表达调控不是必需的 | 第47-51页 |
| 3.2 Ubp-MS552P影响细胞增殖和调控细胞周期进程 | 第51-54页 |
| 3.3 S552P调控Ubp-M与CRM1相互作用 | 第54-57页 |
| 讨论 | 第57-61页 |
| 1 Ubp-M S552P功能模式图 | 第57页 |
| 2 CDK1与表观遗传修饰的关系 | 第57-58页 |
| 3 Ubp-M S552位点的保守性分析 | 第58页 |
| 4 Ubp-M亚细胞定位分析 | 第58-60页 |
| 5 Ubp-M其他磷酸化位点讨论 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-79页 |
| 个人简历 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果清单 | 第82页 |
