| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 常用英文缩略词汇 | 第9-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-30页 |
| 1. 牛丘疹性口炎病毒的研究进展 | 第14-21页 |
| 1.1 牛丘疹性口炎病毒流行病学特征 | 第14页 |
| 1.2 临床症状 | 第14-16页 |
| 1.3 病毒基因组结构 | 第16-17页 |
| 1.4 主要的毒力基因 | 第17-21页 |
| 1.4.1 BPSV-ORF006基因 | 第17-18页 |
| 1.4.2 BPSV-ORF080基因 | 第18页 |
| 1.4.3 BPSV-ORF102和BPSV-ORF103基因 | 第18页 |
| 1.4.4 BPSV-ORF109和BPSV-ORF110基因 | 第18-19页 |
| 1.4.5 BPSV-ORF112基因 | 第19-20页 |
| 1.4.6 BPSV-ORF117基因 | 第20页 |
| 1.4.7 BPSV-ORF127基因 | 第20-21页 |
| 1.5 免疫治疗和重组疫苗 | 第21页 |
| 2. 痘病毒的免疫防御分子 | 第21-30页 |
| 2.1 细胞外防御蛋白 | 第22-24页 |
| 2.1.1 补体调节蛋白 | 第22页 |
| 2.1.2 干扰素结合蛋白 | 第22-23页 |
| 2.1.3 IL-18结合蛋白(IL-18 BPs) | 第23页 |
| 2.1.4 可溶性肿瘤坏死因子结合蛋白 | 第23页 |
| 2.1.5 可溶性IL-1β同源受体 | 第23页 |
| 2.1.6 趋化因子抑制剂 | 第23-24页 |
| 2.1.7 其他的细胞因子结合蛋白和其同源物 | 第24页 |
| 2.1.8 分泌的自然杀伤细胞抑制剂 | 第24页 |
| 2.2 细胞内防御蛋白 | 第24-30页 |
| 2.2.1 细胞模式识别受体的信号通路的抑制剂 | 第24页 |
| 2.2.2 NF-κB信号转导通路抑制剂 | 第24-25页 |
| 2.2.3 肿瘤坏死因子信号通路(IFN)的抑制剂 | 第25页 |
| 2.2.4 抑制细胞凋亡的分子 | 第25-26页 |
| 2.2.5 抑制抗原递呈的分子 | 第26-30页 |
| 第二章 牛丘疹性口炎病毒的分离 | 第30-42页 |
| 1. 材料 | 第30-31页 |
| 1.1 主要试剂 | 第30-31页 |
| 1.2 主要仪器 | 第31页 |
| 2. 方法 | 第31-35页 |
| 2.1 流行情况及临床症状 | 第31-32页 |
| 2.2 样品的采集 | 第32页 |
| 2.3 病理组织学切片的制作 | 第32-33页 |
| 2.3.1 固定 | 第32页 |
| 2.3.2 脱水 | 第32页 |
| 2.3.3 透明 | 第32页 |
| 2.3.4 浸蜡 | 第32页 |
| 2.3.5 包埋 | 第32-33页 |
| 2.3.6 切片 | 第33页 |
| 2.3.7 脱蜡 | 第33页 |
| 2.3.8 HE染色 | 第33页 |
| 2.4 病毒的初步分离培养 | 第33-34页 |
| 2.5 病毒的电镜观察 | 第34页 |
| 2.6 PCR检测目的基因 | 第34-35页 |
| 3. 试验结果与分析 | 第35-41页 |
| 3.1 流行情况及临床症状 | 第35-36页 |
| 3.2 组织切片鉴定 | 第36-38页 |
| 3.3 病毒的初步分离培养结果 | 第38页 |
| 3.4 病毒粒子电镜图 | 第38-39页 |
| 3.5 PCR扩增产物和测序结果 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41页 |
| 5 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 牛丘疹性口炎病毒全基因组测序与C5、C15和C1病毒的分离纯化 | 第42-58页 |
| 1. 材料 | 第43页 |
| 1.1 细胞和病毒 | 第43页 |
| 1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 1.3 主要试剂盒 | 第43页 |
| 1.4 主要仪器 | 第43页 |
| 2. 方法 | 第43-52页 |
| 2.1 病毒TX09全基因测序 | 第43-44页 |
| 2.1.1 病毒TX09基因的抽提 | 第44页 |
| 2.1.2 病毒DNA测序 | 第44页 |
| 2.2 C5、C15病毒的纯化 | 第44-49页 |
| 2.2.1 引物的设计和酶切位点的选择 | 第44-46页 |
| 2.2.2 蚀斑筛选 | 第46页 |
| 2.2.3 病毒的增殖 | 第46页 |
| 2.2.4 病毒DNA检测 | 第46-49页 |
| 2.2.5 阳性克隆的筛选 | 第49页 |
| 2.3 C1病毒的纯化 | 第49-52页 |
| 2.3.1 引物的设计 | 第49页 |
| 2.3.2 蚀斑筛选 | 第49-50页 |
| 2.3.3 病毒的增殖 | 第50页 |
| 2.3.4 样品DNA的抽提 | 第50-51页 |
| 2.3.5 PCR检测目的条带 | 第51-52页 |
| 2.3.6 阳性克隆的筛选 | 第52页 |
| 3. 实验结果和分析 | 第52-55页 |
| 3.1 C5、C15病毒的纯化 | 第52-54页 |
| 3.2 C1病毒的纯化 | 第54-55页 |
| 4. 讨论 | 第55-57页 |
| 5. 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 牛丘疹性口炎病毒C15、C5和C1开放阅读框的标注 | 第58-71页 |
| 1. 材料和方法 | 第58页 |
| 1.1 实验病毒基因序列 | 第58页 |
| 1.2 实验软件及数据库 | 第58页 |
| 2 实验方法 | 第58-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-69页 |
| 3.1 C15,C5,C1病毒同源性比对 | 第59页 |
| 3.2 C15,C5,C1病毒开放阅读框的确定 | 第59-66页 |
| 3.3 密码子偏爱性分析 | 第66-69页 |
| 4. 讨论 | 第69-70页 |
| 5. 小结 | 第70-71页 |
| 第五章 牛丘疹性口炎病毒C15、C5和C1差异开放阅读框的比对 | 第71-83页 |
| 1. 材料 | 第71页 |
| 1.1 病毒 | 第71页 |
| 1.2 主要使用的软件 | 第71页 |
| 2 方法 | 第71页 |
| 3. 结果与分析 | 第71-81页 |
| 4. 讨论 | 第81-82页 |
| 5. 小结 | 第82-83页 |
| 第六章 C5、C15和C1病毒动物接种试验 | 第83-90页 |
| 1. 材料 | 第83-84页 |
| 1.1 细胞、病毒和实验动物 | 第83页 |
| 1.2 主要试剂 | 第83-84页 |
| 1.3 主要试剂盒 | 第84页 |
| 1.4 主要仪器 | 第84页 |
| 2. 方法 | 第84-86页 |
| 2.1 病毒的增殖 | 第84页 |
| 2.2 病毒C5、C15、C1细胞培养物TCID_(50)的测定 | 第84-85页 |
| 2.3 生长曲线的绘制 | 第85页 |
| 2.3.1 多步增长特性(MOI=0.1) | 第85页 |
| 2.3.2 一步增长特性(病毒MOI=10) | 第85页 |
| 2.4 动物接种试验 | 第85-86页 |
| 3. 结果与分析 | 第86-89页 |
| 3.1 病毒C5、C15、C1细胞培养物TCID_(50)的测定 | 第86页 |
| 3.2 生长曲线的测定 | 第86-88页 |
| 3.3 动物接种试验 | 第88-89页 |
| 4 讨论 | 第89页 |
| 5 小结 | 第89-90页 |
| 第七章 酵母双杂交初步筛选与C1-ORF118相互作用的蛋白 | 第90-106页 |
| 1. 材料 | 第90-92页 |
| 1.1 载体及菌株 | 第90页 |
| 1.2 主要试剂的配制 | 第90-92页 |
| 1.3 主要试剂盒 | 第92页 |
| 1.4 主要仪器 | 第92页 |
| 2. 方法 | 第92-100页 |
| 2.1 重组质粒的构 | 第92-96页 |
| 2.1.1 ORFV 118基因的扩增 | 第92-94页 |
| 2.1.2 双酶切酵母载体pGBK7-BD | 第94页 |
| 2.1.3 PCR产物和双酶切酵母载体pGBK7-BD的纯化 | 第94-95页 |
| 2.1.4 ORFV118的连接和转化 | 第95页 |
| 2.1.5 提取质粒DNA | 第95-96页 |
| 2.1.6 ORFV118重组质粒的鉴定 | 第96页 |
| 2.1.7 ORFV118重组质粒的测序 | 第96页 |
| 2.2 酵母双杂交试验 | 第96-100页 |
| 2.2.1 Y2HGold和Y187酵母感受态的制备 | 第96-97页 |
| 2.2.2 酵母细胞转化试验 | 第97页 |
| 2.2.3 pGBK7-118菌株与酵母双杂交cDNA文库中筛选相互作用蛋白 | 第97-98页 |
| 2.2.4 阳性克隆的鉴定 | 第98-99页 |
| 2.2.5 酵母细胞质粒的大肠杆菌转化试验 | 第99-100页 |
| 2.2.6 提取质粒DNA | 第100页 |
| 3. 阳性质粒基因测序 | 第100页 |
| 4. 试验结果与分析 | 第100-104页 |
| 4.1. 病毒ORFV118基因的扩增 | 第100-101页 |
| 4.2 酵母载体酶切 | 第101页 |
| 4.3 重组质粒的鉴定 | 第101-102页 |
| 4.4 重组诱饵质粒pGBKT7-118的毒性及自激活检测 | 第102-103页 |
| 4.5. 诱饵质粒pGBKT7-118和文库酵母双杂交筛选 | 第103-104页 |
| 5. 讨论 | 第104-105页 |
| 6. 小结 | 第105-106页 |
| 全文总结 | 第106-107页 |
| 本论文的创新点 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第126页 |
