| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-25页 |
| ·苏云金芽胞杆菌概述 | 第12-13页 |
| ·芽胞形成过程的调节机制 | 第13-21页 |
| ·芽胞形成起始的调控 | 第14页 |
| ·细胞不对称分裂 | 第14-15页 |
| ·前芽胞染色体分离 | 第15页 |
| ·细胞区室化表达 | 第15-16页 |
| ·母细胞的形成 | 第16-17页 |
| ·芽胞内吞进程 | 第17-18页 |
| ·芽胞发育阶段的调节 | 第18-19页 |
| ·芽胞形态的形成 | 第19页 |
| ·母细胞内的级联调控 | 第19-21页 |
| ·Bt 中cry 基因的表达与调控 | 第21-22页 |
| ·GerE 的功能研究 | 第22-23页 |
| ·本研究的立题依据和目的意义 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-39页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·菌株与质粒 | 第25-26页 |
| ·培养基与抗生素 | 第26页 |
| ·蛋白酶与生物试剂及试剂盒 | 第26-27页 |
| ·核酸序列的测定及引物合成 | 第27页 |
| ·实验仪器设备 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-39页 |
| ·PCR 普通模板制备 | 第28页 |
| ·苏云金芽胞杆菌基因组提取 | 第28页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第28-29页 |
| ·PCR 扩增 | 第29-31页 |
| ·酶切反应 | 第31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31-32页 |
| ·目的DNA 片段的回收 | 第32页 |
| ·DNA 片段连接反应 | 第32页 |
| ·大肠杆菌SCS110 菌株电击感受态细胞的制备和转化 | 第32-33页 |
| ·Bt 的HD-73 菌株电击感受态细胞的制备与转化 | 第33-34页 |
| ·核酸及蛋白质序列分析 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第34-35页 |
| ·同源重组突变体的获得 | 第35页 |
| ·Bt 菌株生长曲线的测定 | 第35页 |
| ·活芽胞计数 | 第35页 |
| ·β-半乳糖苷酶的活性分析 | 第35-36页 |
| ·Bt 芽胞的制备 | 第36-37页 |
| ·Bt 芽胞萌发实验 | 第37页 |
| ·Bt 芽胞溶菌酶抗性实验 | 第37-38页 |
| ·gerE 基因在大肠杆菌中的表达与提取 | 第38页 |
| ·GerE 融合蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-62页 |
| ·gerE 基因的克隆表达与序列分析 | 第39-42页 |
| ·gerE 基因的克隆 | 第39-40页 |
| ·gerE 基因的表达 | 第40-41页 |
| ·gerE 基因融合蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·gerE 基因表达产物的生物信息学分析 | 第42页 |
| ·gerE 基因缺失突变菌株的构建与鉴定 | 第42-47页 |
| ·gerE 基因缺失片段的选取 | 第42-45页 |
| ·gerE 基因缺失重组敲除载体的构建与鉴定 | 第45-46页 |
| ·gerE 基因突变体的筛选与验证 | 第46-47页 |
| ·gerE 基因过表达菌株的构建 | 第47-49页 |
| ·gerE 基因的缺失与过表达菌株的表型特点 | 第49-54页 |
| ·芽胞膜表型差异 | 第49-50页 |
| ·菌体裂解时间的差异 | 第50页 |
| ·菌株的生长速率比较 | 第50-51页 |
| ·活芽胞计数分析 | 第51页 |
| ·gerE 基因的缺失与过表达对芽胞萌发的影响 | 第51-53页 |
| ·gerE 基因的缺失与过表达下芽胞对溶菌酶的耐受性 | 第53-54页 |
| ·gerE 基因转录调控分析 | 第54-57页 |
| ·gerE 基因转录分析载体构建 | 第54-55页 |
| ·sigK 基因插入失活突变株的构建 | 第55-56页 |
| ·gerE 基因的转录活性分析及sigK 基因的缺失对其的影响 | 第56-57页 |
| ·gerE 基因的缺失对sigK 基因转录活性的影响 | 第57-58页 |
| ·gerE 基因的缺失与过表达对Cry 蛋白表达的影响 | 第58-62页 |
| ·在LB 培养基中Cry 蛋白表达比较差异 | 第58-59页 |
| ·cry1Ac 基因的转录比较分析 | 第59-62页 |
| 第四章 讨论 | 第62-66页 |
| ·gerE 基因在苏云金芽胞杆菌HD-73 菌株中可能的调控模型 | 第62-63页 |
| ·gerE 基因的缺失对菌株表型的影响 | 第63-65页 |
| ·构建新型Bt 工程菌的展望 | 第65-66页 |
| 第五章 全文结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 作者简历 | 第79页 |
