| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词及英汉对照表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-21页 |
| 1 OPA3蛋白的功能及研究概况 | 第14-16页 |
| 1.1 OPA3蛋白的功能研究 | 第14-15页 |
| 1.2 番茄OPA3-like在酵母细胞中与HC-Pro相互作用 | 第15页 |
| 1.3 番茄OPA3-like在洋葱表皮细胞中与HC-Pro的相互作用 | 第15-16页 |
| 2 植物蛋白亚细胞定位 | 第16-17页 |
| 2.1 亚细胞定位方法 | 第16-17页 |
| 2.2 亚细胞定位在植物病理学研究中的应用 | 第17页 |
| 3 RNAi技术研究概况 | 第17-20页 |
| 3.1 RNAi的原理 | 第18页 |
| 3.2 制备siRNA的方法 | 第18页 |
| 3.3 RNAi表达载体的构建及其在植物中的诱导 | 第18-19页 |
| 3.4 在植物中的运用及展望 | 第19-20页 |
| 4 研究的技术路线、内容及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 原核表达载体和植物表达载体的构建 | 第21-37页 |
| 1 材料 | 第21页 |
| 1.1 菌株与载体 | 第21页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第21页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第21页 |
| 1.4 主要试剂和培养基的配制 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-32页 |
| 2.1 相关目的片段的PCR引物设计及扩增 | 第21-23页 |
| 2.2 目的片段的T载体的构建及序列测定 | 第23-25页 |
| 2.3 OPA3-like蛋白原核表达载体的构建 | 第25-27页 |
| 2.4 OPA3-like亚细胞定位载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.5 OPA3-like过表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.6 OPA3-like干扰载体的构建 | 第29-32页 |
| 3 结果和分析 | 第32-37页 |
| 3.1 YH-OPA3L、OPA3L-GFP、OPA3L、Ri-OPA3L的PCR扩增及测序 | 第32-33页 |
| 3.2 OPA3-like原核表达载体的鉴定 | 第33页 |
| 3.3 OPA3-like亚细胞定位载体的鉴定 | 第33-34页 |
| 3.4 OPA3-like过表达载体的鉴定 | 第34页 |
| 3.5 中间克隆载体的鉴定 | 第34-35页 |
| 3.6 OPA3-like干扰表达载体的鉴定 | 第35-37页 |
| 第三章 OPA3-like的生物信息学分析及原核表达 | 第37-43页 |
| 1 材料 | 第37页 |
| 1.1 菌株 | 第37页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第37页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第37页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-39页 |
| 2.1 OPA3-like的生物信息学分析 | 第37页 |
| 2.2 OPA3-like的原核表达 | 第37-39页 |
| 2.3 融合蛋白的可溶性检测 | 第39页 |
| 3 结果和分析 | 第39-43页 |
| 3.1 OPA3-like的生物信息学分析 | 第39-41页 |
| 3.2 OPA3-like的原核表达 | 第41-42页 |
| 3.3 融合蛋白的可溶性分析 | 第42-43页 |
| 第四章 OPA3-like蛋白的亚细胞定位 | 第43-50页 |
| 1 材料 | 第43页 |
| 1.1 菌株和植物材料 | 第43页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第43页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第43页 |
| 1.4 主要试剂和培养基的配制 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-47页 |
| 2.1 无菌烟草苗的种植 | 第43页 |
| 2.2 表达载体电击转化农杆菌 | 第43-44页 |
| 2.3 阳性菌落的PCR鉴定 | 第44页 |
| 2.4 浸染液的制备 | 第44-45页 |
| 2.5 烟草的遗传转化 | 第45-46页 |
| 2.6 转基因烟草的鉴定 | 第46页 |
| 2.7 亚细胞定位荧光观察 | 第46-47页 |
| 3 结果和分析 | 第47-50页 |
| 3.1 表达载体转化农杆菌的菌液PCR检测 | 第47页 |
| 3.2 烟草的遗传转化 | 第47页 |
| 3.3 转基因烟草的PCR检测 | 第47-48页 |
| 3.4 亚细胞定位荧光观察 | 第48-50页 |
| 第五章 OPA3-like及其RNAi片段分别遗传转化植株 | 第50-56页 |
| 1 材料 | 第50页 |
| 1.1 菌株和植物材料 | 第50页 |
| 1.2 主要实验试剂和仪器设备 | 第50页 |
| 1.3 主要试剂和培养基的配制 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-51页 |
| 2.1 无菌苗的种植 | 第50页 |
| 2.2 侵染液的制备 | 第50页 |
| 2.3 番茄的遗传转化 | 第50-51页 |
| 2.4 烟草的遗传转化 | 第51页 |
| 2.5 转基因植株的PCR检测 | 第51页 |
| 3 结果和分析 | 第51-56页 |
| 3.1 表达载体转化农杆菌的菌液PCR检测 | 第51-52页 |
| 3.2 番茄的遗传转化 | 第52页 |
| 3.3 烟草的遗传转化 | 第52页 |
| 3.4 OPA3-like过表达片段的转基因植株PCR检测 | 第52-53页 |
| 3.5 OPA3-like过表达片段的转基因烟草和番茄表型 | 第53-55页 |
| 3.6 OPA3-like RNAi片段的转基因番茄PCR检测及其表型 | 第55-56页 |
| 第六章 讨论与结论 | 第56-59页 |
| 1 番茄OPA3-like的生物信息学分析及原核表达 | 第56-57页 |
| 2 番茄OPA3-like的亚细胞定位分析 | 第57页 |
| 3 番茄OPA3-like可能参与色素的合成 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 附录 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 附件 | 第73页 |
