| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-28页 |
| 1 精原干细胞 | 第11-14页 |
| 2 精原干细胞的来源 | 第14-15页 |
| 3 精原干细胞形成过程中的标记基因 | 第15-17页 |
| 4 精原干细胞形成过程中的基因调控 | 第17-20页 |
| 5 精原干细胞形成的诱导体系 | 第20页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 7 参考文献 | 第21-28页 |
| 第二章 LBC基因cDNA序列的克隆 | 第28-35页 |
| 1 材料与方法 | 第28-32页 |
| 1.1 实验材料与试剂 | 第28页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第28页 |
| 1.3 引物设计与合成 | 第28-29页 |
| 1.4 鸡睾丸组织总RNA提取 | 第29页 |
| 1.5 睾丸组织RNA的反转录 | 第29-30页 |
| 1.6 LBC基因克隆 | 第30-31页 |
| 1.7 LBC基因TA克隆及测序 | 第31-32页 |
| 2 结果 | 第32-34页 |
| 2.1 LBC的PCR扩增结果 | 第32-33页 |
| 2.2 菌液PCR结果 | 第33页 |
| 2.3 测序结果 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34页 |
| 4 本章小结 | 第34页 |
| 5 参考文献 | 第34-35页 |
| 第三章 LBC基因多抗制备及亚细胞定位研究 | 第35-47页 |
| 1 材料与方法 | 第35-39页 |
| 1.1 试验材料 | 第35页 |
| 1.2 试验试剂 | 第35页 |
| 1.3 引物设计与合成 | 第35-36页 |
| 1.4 小鼠抗LBC基因多克隆抗体的制备及其效价检测 | 第36-37页 |
| 1.5 DF-1细胞的传代培养 | 第37-38页 |
| 1.6 真核表达载体pEGFP-N1-LBC的构建 | 第38页 |
| 1.7 LBC蛋白的亚细胞定位预测 | 第38-39页 |
| 1.8 真核表达载体转染试验 | 第39页 |
| 1.9 融合表达载体在mRNA水平上的检测 | 第39页 |
| 1.10 IFA检测LBC蛋白的表达 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-44页 |
| 2.1 LBC基因多克隆抗体的制备 | 第39-41页 |
| 2.2 DF-1细胞的培养 | 第41页 |
| 2.3 真核表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 2.4 LBC蛋白亚细胞定位预测 | 第42页 |
| 2.5 融合蛋白eGFP -LBC在细胞中的定位 | 第42-43页 |
| 2.6 融合表达载体在mRNA水平上的检测结果 | 第43-44页 |
| 2.7 IFA检测LBC基因蛋白的表达 | 第44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 4 本章小结 | 第45-46页 |
| 5 参考文献 | 第46-47页 |
| 第四章 LBC基因对鸡胚胎干细向精原干细胞分化的影响 | 第47-67页 |
| 1 材料与方法 | 第47-53页 |
| 1.1 试验材料 | 第47页 |
| 1.2 试验试剂 | 第47-48页 |
| 1.3 LBC基因敲除载体的构建 | 第48-49页 |
| 1.4 真核表达载体pcDNA3.0-LBC的构建 | 第49页 |
| 1.5 酶切验证CRISPR/Cas9-LBC载体活性 | 第49-50页 |
| 1.6 Western Blot检测CRISP/Cas9-LBC和pcDNA3.0-LBC活性 | 第50-51页 |
| 1.7 LBC基因功能体外验证 | 第51-52页 |
| 1.8 LBC基因功能体内验证 | 第52-53页 |
| 2 结果 | 第53-62页 |
| 2.1 过表达载体pcDNA3.0-LBC载体的构建 | 第53-54页 |
| 2.2 LBC基因敲除载体的构建和DF-1细胞上的活性验证 | 第54-56页 |
| 2.3 LBC基因敲除和过表达在体外对ESCs向SSCs分化的影响 | 第56-60页 |
| 2.4 LBC基因敲除和过表达在体内对PGCs和SSCs发生的影响 | 第60-62页 |
| 3 讨论 | 第62-65页 |
| 4 本章小结 | 第65页 |
| 5 参考文献 | 第65-67页 |
| 第五章 结论和创新点 | 第67-68页 |
| 结论 | 第67页 |
| 创新点 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第70-71页 |
