| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-29页 |
| 1.1 甘蓝型油菜细胞核雄性不育的研究进展 | 第13页 |
| 1.2 植物花药发育调控 | 第13-20页 |
| 1.2.1 植物花药发育的细胞学过程 | 第14-16页 |
| 1.2.2 花药绒毡层的发育及功能 | 第16-19页 |
| 1.2.3 花粉发育分子机理 | 第19-20页 |
| 1.3 半胱氨酸蛋白酶调控花药发育的分子机理 | 第20-26页 |
| 1.3.1 半胱氨酸蛋白酶的分类 | 第21-22页 |
| 1.3.2 半胱氨酸蛋白酶基因的功能 | 第22-23页 |
| 1.3.3 半胱氨酸蛋白酶基因的调控 | 第23-26页 |
| 1.4 利用基因工程创造不育系 | 第26-27页 |
| 1.4.1 破坏花药绒毡层的发育创造植物雄性不育 | 第26页 |
| 1.4.2 利用RNAi技术创造植物雄性不育 | 第26-27页 |
| 1.4.3 利用胼胝质的异常降解创造雄性不育 | 第27页 |
| 1.5 信号转导分子及绒毡层PCD的发生 | 第27-28页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第29页 |
| 2.2 质粒载体和菌株 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-50页 |
| 2.3.1 总RNA的提取、检测及浓度测定 | 第29-30页 |
| 2.3.2 反转录和qRT-PCR | 第30-31页 |
| 2.3.3 遗传转化载体的构建及转化方法 | 第31-35页 |
| 2.3.4 序列分析 | 第35页 |
| 2.3.5 转化不育株的细胞学鉴定 | 第35-37页 |
| 2.3.6 TUNEL检测花药绒毡层PCD | 第37-39页 |
| 2.3.7 组织原位杂交 | 第39-48页 |
| 2.3.8 GUS染色分析 | 第48-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-82页 |
| 3.1 花药中表达的半胱氨酸蛋白酶基因的分离 | 第50-51页 |
| 3.2 差异表达分析 | 第51-53页 |
| 3.3 提前表达和过表达拟南芥基因CP1, CP20, CP13和CP21 | 第53页 |
| 3.4 油菜基因BnaC.CP20.1 的功能研究 | 第53-69页 |
| 3.4.1 BnaC.CP20.1 的克隆及分析 | 第53-55页 |
| 3.4.2 BnaC.CP20.1 的表达模式 | 第55-58页 |
| 3.4.3 提前表达BnaC.CP20.1 影响植物生长发育 | 第58-60页 |
| 3.4.4 转化植株的表型观察 | 第60-69页 |
| 3.5 油菜基因BnaCP13的功能研究 | 第69-82页 |
| 3.5.1 BnaCP13的克隆及分析 | 第69-71页 |
| 3.5.2 提前表达BnCP13转化拟南芥 | 第71-72页 |
| 3.5.3 提前表达BnaCP13转化甘蓝型油菜?Westar‘ | 第72-73页 |
| 3.5.4 BnaC.CP13.4 的表达模式 | 第73-75页 |
| 3.5.5 提前表达BnaC.CP13.4 的表型观察 | 第75-82页 |
| 4 讨论 | 第82-90页 |
| 4.1 BnaC.CP20.1 和BnaC.CP13.4 编码的半胱氨酸蛋白酶同属于C1A亚家族 | 第82页 |
| 4.2 BnaC.CP20.1 和BnaC.CP13.4 属于植物发育特定时期表达的半胱氨酸蛋白酶 | 第82-84页 |
| 4.3 半胱氨酸蛋白酶之间可能存在功能冗余 | 第84-85页 |
| 4.4 BnaC.CP20.1 和BnaC.CP13.4 异常PCD的发生导致雄性不育 | 第85-87页 |
| 4.5 展望 | 第87-90页 |
| 4.5.1 如何考察功能冗余基因的作用 | 第87-88页 |
| 4.5.2 BnaA.CP13.1 转化株的不育性稳定问题 | 第88-89页 |
| 4.5.3 转录因子调控半胱氨酸蛋白酶参与绒毡层PCD | 第89页 |
| 4.5.4 信号分子参与绒毡层PCD | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-101页 |
| 附录 | 第101-105页 |
| 附录1 本文所用的引物 | 第101-104页 |
| 附录2 作者简介及在读期间发表论文 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
