| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 油菜BAC文库构建与相关基因的筛选 | 第11页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 油菜研究的重要性与意义 | 第11-12页 |
| 1.2 克隆载体的发展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 λ 噬菌体载体 | 第12-13页 |
| 1.2.2 Cosmid质粒载体 | 第13页 |
| 1.2.3 P1噬菌体载体 | 第13页 |
| 1.2.4 YAC载体 | 第13-14页 |
| 1.2.5 PAC载体 | 第14页 |
| 1.2.6 TAC载体 | 第14页 |
| 1.2.7 BIBAC载体 | 第14-15页 |
| 1.3 BAC载体简介 | 第15-18页 |
| 1.3.1 pBAC108L载体 | 第15-16页 |
| 1.3.2 pBeloBAC11和pBACe3.6 载体 | 第16-17页 |
| 1.3.3 pCUGIBAC1和pHZAUBAC1载体 | 第17-18页 |
| 1.4 BAC文库的应用 | 第18-23页 |
| 1.4.1 BAC文库在构建物理图谱中的应用 | 第18-19页 |
| 1.4.2 基因的图位克隆 | 第19-20页 |
| 1.4.3 BAC文库在测序技术中的应用 | 第20页 |
| 1.4.4 BAC文库在比较基因组学中的应用 | 第20页 |
| 1.4.5 BAC文库在荧光原位杂交（FISH）中的应用 | 第20-21页 |
| 1.4.6 BAC文库在其他方面的应用 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-41页 |
| 2.1 材料 | 第23页 |
| 2.2 实验仪器与试剂 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-34页 |
| 2.3.1 BAC载体制备 | 第23-26页 |
| 2.3.1.1 pHZAUBAC1质粒的提取 | 第23-24页 |
| 2.3.1.2 p Indigo BAC536-S载体的制备 | 第24-26页 |
| 2.3.2 油菜BAC文库构建 | 第26-31页 |
| 2.3.2.1 高分子量DNA制备 | 第26-28页 |
| 2.3.2.2 部分酶切 | 第28页 |
| 2.3.2.3 大量酶切（第一次片段筛选） | 第28-29页 |
| 2.3.2.4 DNA片段第二次筛选 | 第29页 |
| 2.3.2.5 电洗脱与洗脱产物浓度检测 | 第29-30页 |
| 2.3.2.6 DNA片段与载体连接 | 第30页 |
| 2.3.2.7 脱盐、预转化、检测 | 第30-31页 |
| 2.3.2.8 大量转化、挑拣单克隆 | 第31页 |
| 2.3.3 BAC文库鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.3.1 文库平均插入片段、空载率以及覆盖度的检测 | 第31页 |
| 2.3.3.2 文库细胞器污染率的估测 | 第31-32页 |
| 2.3.4 BAC文库的复制 | 第32页 |
| 2.3.5 BAC文库的基因筛选 | 第32-34页 |
| 2.3.5.1 一级混合池的构建与PCR筛选 | 第32-33页 |
| 2.3.5.2 二级混合池的构建与PCR筛选 | 第33-34页 |
| 2.4 结果与分析 | 第34-38页 |
| 2.4.1 高分子量DNA的提取及包埋块的制备 | 第34-35页 |
| 2.4.2 DNA部分酶切 | 第35-36页 |
| 2.4.3 大量酶切和一次筛选 | 第36-37页 |
| 2.4.4 DNA洗脱回收、连接、预转 | 第37页 |
| 2.4.5 预转化结果检测 | 第37页 |
| 2.4.6 BAC文库质量检测 | 第37-38页 |
| 2.4.7 PCR筛选结果 | 第38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-41页 |
| 2.5.1 如何提取高质量的DNA | 第38-39页 |
| 2.5.2 部分酶切的重要性 | 第39页 |
| 2.5.3 影响PCR筛选的因素 | 第39-41页 |
| 第二章 水稻BAC克隆BIBAC亚克隆文库的构建与基因筛选 | 第41-56页 |
| 3 前言 | 第41-42页 |
| 4 材料与方法 | 第42-56页 |
| 4.1 实验材料 | 第42页 |
| 4.2 实验仪器与试剂 | 第42页 |
| 4.3 实验方法 | 第42-49页 |
| 4.3.1 BIBAC载体的制备 | 第42-45页 |
| 4.3.1.1 pHZAUBIBAC1载体质粒的提取 | 第42-43页 |
| 4.3.1.2 BIBAC-S载体的制备 | 第43-45页 |
| 4.3.2 BIABC文库的构建 | 第45-48页 |
| 4.3.2.1 DNA的提取 | 第45-46页 |
| 4.3.2.2 寻找BAC质粒部分酶切的最适条件（预酶切） | 第46页 |
| 4.3.2.3 大量酶切 | 第46-47页 |
| 4.3.2.4 电洗脱与洗脱产物浓度检测 | 第47页 |
| 4.3.2.5 DNA片段与载体连接 | 第47页 |
| 4.3.2.6 脱盐、预转化、检测 | 第47-48页 |
| 4.3.3 BIBAC文库鉴定 | 第48页 |
| 4.3.3.1 文库平均插入片段、空载率以及覆盖度的检测 | 第48页 |
| 4.3.4 BIBAC文库的基因筛选 | 第48-49页 |
| 4.4 结果与分析 | 第49-53页 |
| 4.4.1 载体的制备 | 第49-50页 |
| 4.4.1.1 高浓度的pHZAUBIBAC1质粒制备 | 第49页 |
| 4.4.1.2 质粒pHZAUBIBAC1的完全酶切 | 第49-50页 |
| 4.4.1.3 载体BIBAC-S的脱磷与回收 | 第50页 |
| 4.4.1.4 BIBAC载体效率的检测 | 第50页 |
| 4.4.2 BIBAC文库的构建 | 第50-53页 |
| 4.4.2.1 BAC DNA的提取 | 第50-51页 |
| 4.4.2.2 预酶切的分析 | 第51页 |
| 4.4.2.3 大量酶切与片段筛选分析 | 第51-52页 |
| 4.4.2.4 洗脱产物浓度检测结果 | 第52-53页 |
| 4.4.2.5 文库的鉴定 | 第53页 |
| 4.4.2.6 PCR筛选结果 | 第53页 |
| 4.5 讨论 | 第53-56页 |
| 4.5.1 载体的制备与酶的选择 | 第54页 |
| 4.5.2 DNA浓度的重要性 | 第54页 |
| 4.5.3 预酶切的必要性 | 第54-55页 |
| 4.5.4 大量酶切和一筛对文库质量的影响 | 第55页 |
| 4.5.5 洗脱产物浓度对连接反应的影响 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 附录一 部分实验试剂配方 | 第64-66页 |
| 1.1 冰冻培养基配方 | 第64-65页 |
| 1.2 碱裂解P1，P2，P3溶液 | 第65-66页 |
| 附录二 基因筛选引物信息及PCR反应体系 | 第66-68页 |
| 2.1 引物信息 | 第66页 |
| 2.2 引物的退火温度和扩增片段大小 | 第66-67页 |
| 2.3 PCR筛选体系及参数 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
