| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 符号与缩略语说明 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 第一节 有机磷农药概述 | 第13-18页 |
| 1. 有机磷农药的化学结构及危害机理 | 第13-14页 |
| 2. 甲基对硫磷的性质及危害 | 第14-16页 |
| 3. 有机磷农药在环境中的降解方式 | 第16-18页 |
| 第二节 微生物降解有机磷农药的研究进展 | 第18-25页 |
| 1. 降解有机磷农药的微生物 | 第18-20页 |
| 2. 甲基对硫磷的代谢机理及途径 | 第20-21页 |
| 3. 甲基对硫磷水解酶MPH的结构与功能研究 | 第21-22页 |
| 4. 有机磷水解酶基因 | 第22页 |
| 5. 有机磷水解酶基因的水平转移 | 第22-23页 |
| 6. 微生物降解有机磷农药展望 | 第23-25页 |
| 第二章 甲基对硫磷降解菌的分离及生物学特性研究 | 第25-39页 |
| 1. 材料与方法 | 第25-29页 |
| ·供试菌株、试剂及培养基 | 第25-26页 |
| ·甲基对硫磷降解菌的分离 | 第26页 |
| ·降解菌株的培养特征及生理生化鉴定 | 第26页 |
| ·16S rRNA基因序列的扩增及测序 | 第26-28页 |
| ·降解菌株系统发育地位的确定 | 第28页 |
| ·菌体生长量的测定 | 第28-29页 |
| 2. 结果与讨论 | 第29-38页 |
| ·甲基对硫磷降解菌的分离 | 第29-30页 |
| ·降解菌株的菌落形态、生理生化特征 | 第30-31页 |
| ·菌株DLP-2的16S rRNA基因序列扩增 | 第31-32页 |
| ·菌株DLP-2的鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·环境条件对降解菌株DLP-2生长的影响 | 第33-38页 |
| 3. 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 甲基对硫磷降解菌株DLP-2的降解特性研究 | 第39-45页 |
| 1. 材料与方法 | 第39-40页 |
| ·培养基与试剂 | 第39页 |
| ·供试菌株 | 第39页 |
| ·菌体生长量的测定 | 第39页 |
| ·有机磷农药及PNP的含量检测方法 | 第39-40页 |
| ·种子液培养 | 第40页 |
| 2. 结果与讨论 | 第40-44页 |
| ·甲基对硫磷降解、对硝基酚生成和菌株DLP-2生长的关系 | 第40-41页 |
| ·甲基对硫磷起始浓度对菌株DLP-2降解甲基对硫磷的影响 | 第41页 |
| ·pH值对菌株DLP-2降解甲基对硫磷的影响 | 第41-42页 |
| ·温度对菌株DLP-2降解甲基对硫磷的影响 | 第42-43页 |
| ·接种量对菌株DLP-2降解甲基对硫磷的影响 | 第43页 |
| ·菌株DLP-2对其他几种有机磷农药的降解 | 第43-44页 |
| 3. 小结 | 第44-45页 |
| 第四章 有机磷水解酶基因(mpd)的克隆及表达 | 第45-55页 |
| 1. 材料和方法 | 第45-50页 |
| ·培养基与试剂 | 第45页 |
| ·菌株与质粒 | 第45-46页 |
| ·菌体基因组DNA的提取 | 第46页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第46页 |
| ·普通感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| ·有机磷水解酶基因的引物设计和PCR扩增 | 第47-50页 |
| 2. 结果与讨论 | 第50-54页 |
| ·PCR法克隆甲基对硫磷水解酶基因 | 第50页 |
| ·序列测定与比较分析 | 第50-51页 |
| ·mpd基因在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第51-54页 |
| 3. 小结 | 第54-55页 |
| 第五章 基因簇Tnmpd的扩增、分析及功能验证 | 第55-65页 |
| 1. 材料与方法 | 第55-59页 |
| ·培养基与试剂 | 第55页 |
| ·菌株与质粒 | 第55-56页 |
| ·菌株基因组DNA和质粒的提取 | 第56页 |
| ·有机磷农药及PNP的含量检测方法 | 第56页 |
| ·基因簇的PCR扩增 | 第56-57页 |
| ·PCR产物的TA克隆 | 第57页 |
| ·基因序列的测定与序列分析 | 第57-58页 |
| ·PCR产物的纯化及酶切 | 第58页 |
| ·载体的制备 | 第58页 |
| ·酶连及酶连产物的转化 | 第58页 |
| ·三亲结合 | 第58-59页 |
| ·受体菌降解性能的检测 | 第59页 |
| 2. 结果与讨论 | 第59-64页 |
| ·Tnmpd基因簇的扩增和分析 | 第59页 |
| ·序列测定与比较分析 | 第59-60页 |
| ·重组质粒pJQ-Tnmpd的构建与转化 | 第60-62页 |
| ·菌株KT2440/Tnmpd中mpd和Tnmpd基因的扩增 | 第62-63页 |
| ·菌株KT2440/Tnmpd对甲基对硫磷的降解 | 第63-64页 |
| 3. 小结 | 第64-65页 |
| 全文总结 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 附录一 文中所用培养基及试剂配方 | 第73-77页 |
| 附录二 相关DNA序列 | 第77-81页 |
| 附录三 攻读硕士学位期间发表或已接受的论文 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
