| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 符号与缩略语说明 | 第9-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-21页 |
| 一、联苯与多氯联苯的微生物降解 | 第11-16页 |
| 1. 联苯的概述 | 第11页 |
| 2. 多氯联苯的概述 | 第11-12页 |
| 3. 降解途径 | 第12-16页 |
| ·厌氧降解途径 | 第12页 |
| ·好氧降解途径 | 第12-13页 |
| ·降解相关基因组织结构 | 第13-16页 |
| 二、2,3-二羟基联苯1,2-双加氧酶的研究进展 | 第16-21页 |
| 1. 双加氧酶概述 | 第16页 |
| 2. 间位双加氧酶的分类 | 第16-18页 |
| 3. 2,3-二羟联苯双加氧酶的催化机制 | 第18-19页 |
| 4. 研究意义 | 第19-21页 |
| 实验部分 | 第21-53页 |
| 第一章 三个2,3-二羟基联苯1,2-双加氧酶基因的克隆及表达 | 第21-31页 |
| 1. 材料与方法 | 第21-26页 |
| ·培养基与试剂 | 第21页 |
| ·菌株与质粒 | 第21-22页 |
| ·菌体基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·一步法感受态细胞的制备与转化 | 第23页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第23页 |
| ·2,3-DHBP双加氧酶基因的PCR扩增及及高效表达载体的构建 | 第23-25页 |
| ·六聚组氨酸标记的2,3-DHBD的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第25-26页 |
| 2. 结果与分析 | 第26-30页 |
| ·菌株BP3和阳性克隆的功能验证 | 第26-27页 |
| ·2,3-DHBD基因的扩增及重组表达载体的构建 | 第27-29页 |
| ·六聚组氨酸标记的2,3-DHBD在E coli BL21中的表达及SDS-PAGE分析 | 第29-30页 |
| 3. 小结 | 第30-31页 |
| 第二章 三个2,3-二羟基联苯1,2-双加氧酶的纯化及酶学特性研究 | 第31-45页 |
| 1. 材料与方法 | 第31-35页 |
| ·培养基与试剂 | 第31页 |
| ·菌株与质粒 | 第31页 |
| ·2,3-DHBD的Ni~(2+)亲和层析纯化 | 第31-33页 |
| ·酶活力检测 | 第33-34页 |
| ·温度对2,3-DHBD的影响 | 第34页 |
| ·pH对2,3-DHBD的影响 | 第34页 |
| ·金属离子对2,3-DHBD的影响 | 第34-35页 |
| 2. 结果与分析 | 第35-43页 |
| ·2.3- DHBD的纯化及SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
| ·2,3-DHBD的反应进程曲线 | 第36-37页 |
| ·温度对2,3-DHBD的影响 | 第37-39页 |
| ·pH对2,3-DHBD的影响 | 第39-41页 |
| ·金属离子对酶活性的影响 | 第41-42页 |
| ·2,3-DHBD对不同底物的动力学常数 | 第42-43页 |
| 3. 小结 | 第43-45页 |
| 第三章 三个2,3-二羟基联苯1,2-双加氧酶基因在BP3中表达调控的初步研究 | 第45-53页 |
| 1. 材料与方法 | 第45-47页 |
| ·培养基与试剂 | 第45页 |
| ·菌株 | 第45-46页 |
| ·菌体样品的制备 | 第46页 |
| ·RNA的提取 | 第46-47页 |
| ·cDNA的制备 | 第47页 |
| ·普通PCR扩增目的片段 | 第47页 |
| 2. 结果与分析 | 第47-52页 |
| ·RNA的提取及质量检测 | 第47-48页 |
| ·菌株BP3中bphC、bphC2及xylE的诱导转录分析 | 第48-52页 |
| 3. 小结 | 第52-53页 |
| 全文总结 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 附录一 实验用培养基及分子生物学试剂 | 第63-65页 |
| 附录二 相关基因序列 | 第65-67页 |
| 附录三 攻读硕士学位期间发表或已录用的论文 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
