| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 研究背景简介 | 第17-47页 |
| 第一节 WNT 信号通路及其在骨骼发育和骨质重塑中的作用 | 第17-41页 |
| 一、 骨骼发育概述 | 第17-21页 |
| 二、 出生后骨质重塑概述 | 第21-29页 |
| 三、 Wnt 信号通路概述 | 第29-35页 |
| 四、 Wnt 信号通路在骨骼发育过程中的重要作用 | 第35-37页 |
| 五、 Wnt 信号通路在出生后骨质重塑中的重要作用 | 第37-41页 |
| 第二节 骨内膜的成骨 NICHE 和间充质干细胞的自我更新 | 第41-47页 |
| 一、 干细胞 niche 和骨内膜成骨 niche 概述 | 第41-43页 |
| 二、 骨髓间充质干细胞的微环境(BMSC niche)概述 | 第43-44页 |
| 三、 Wnt 信号通路对于骨髓间充质干细胞(BMSCs)的调控 | 第44-47页 |
| 第二章 实验方法 | 第47-81页 |
| 第一节 实验动物和设施 | 第47-48页 |
| 一、实验动物设施 | 第47页 |
| 二、实验小鼠 | 第47-48页 |
| 第二节 原代头骨细胞实验 | 第48-56页 |
| 一、 原代头骨细胞分离培养 | 第48-49页 |
| 二、 原代头骨细胞体外诱导 | 第49-50页 |
| 三、 原代头骨细胞 BrdU 免疫组化 | 第50-51页 |
| 四、 原代头骨细胞凋亡检测 | 第51-52页 |
| 五、 原代头骨细胞蛋白抽提 | 第52-53页 |
| 六、 原代头骨细胞 western blot | 第53-56页 |
| 第三节 原代头骨和密致骨的 RNA 抽提 | 第56-58页 |
| 一、 原代头骨细胞 RNA 抽提 | 第56-57页 |
| 二、 密致骨 RNA 抽提 | 第57-58页 |
| 第四节 普通 PCR,反转录 PCR 和定量 PCR | 第58-62页 |
| 一、 普通 PCR 和基因分型 | 第58-59页 |
| 二、 反转录 PCR | 第59-60页 |
| 三、 定量 PCR | 第60-62页 |
| 第五节 组织包埋和组织切片 | 第62-65页 |
| 一、 解剖和脱钙 | 第62-63页 |
| 二、 冰冻包埋和冰冻切片 | 第63-64页 |
| 三、 石蜡包埋和石蜡切片 | 第64-65页 |
| 第六节 组织染色和组织免疫组化 | 第65-76页 |
| 一、 骨架染色 | 第65-66页 |
| 二、 H&E 染色 | 第66-67页 |
| 三、 番红 O 染色 | 第67-68页 |
| 四、 Von Kossa 染色 | 第68-69页 |
| 五、 Trap 染色 | 第69-70页 |
| 六、 LacZ 染色 | 第70-71页 |
| 七、 冰冻切片免疫组化 | 第71-72页 |
| 八、 石蜡切片免疫组化 | 第72-74页 |
| 九、 石蜡切片 BrdU 检测 | 第74-75页 |
| 十、 石蜡切片 Tunel 检测 | 第75-76页 |
| 第七节 CFU-F 实验和 FCAS 实验 | 第76-78页 |
| 一、 骨髓间充质干细胞(BMSC) CFU-F 实验 | 第76-77页 |
| 二、 骨髓间充质干细胞(BMSC) FCAS 实验 | 第77-78页 |
| 第八节 骨髓单核细胞(BMMS)分离和共培养实验 | 第78-81页 |
| 一、 骨髓单核细胞(BMMs) 分离 | 第78-79页 |
| 二、 骨髓单核细胞和原代头骨细胞共培养 | 第79-81页 |
| 第三章 实验结果 | 第81-109页 |
| 第一节 WNT 表达谱和 CRE 的表达区域鉴定 | 第81-85页 |
| 一、 多种经典和非经典的 Wnt 蛋白在成骨细胞中表达 | 第81-83页 |
| 二、 Cre 小鼠 Cre 活性表达检测 | 第83-85页 |
| 第二节 在未成熟的成骨细胞中敲除 WNTLESS 导致骨质减少 | 第85-92页 |
| 一、 在未成熟的成骨细胞中敲除 Wntless 导致骨质显著减少 | 第85-90页 |
| 二、 在成熟的成骨细胞中敲除 Wntless 骨质减少不明显 | 第90-92页 |
| 第三节 在未成熟的成骨细胞中敲除 WNTLESS 蛋白导致成骨缺陷 | 第92-96页 |
| 一、 在未成熟的成骨细胞中敲除 Wntless 导致成骨增殖减少和凋亡增加 | 第92-94页 |
| 二、 在未成熟的成骨细胞中敲除 Wntless 导致成骨分化减弱 | 第94-95页 |
| 三、 在成熟的成骨细胞中敲除 Wntless 成骨细胞数量减少不明显 | 第95-96页 |
| 第四节 在未成骨细胞中敲除 WNTLESS 蛋白导致破骨生成增多 | 第96-105页 |
| 一、 在未成熟的成骨细胞中敲除 Wntless 导致破骨细胞数量增加 | 第96-99页 |
| 二、 在成熟的成骨细胞中敲除 Wntless 导致不影响破骨生成 | 第99-100页 |
| 三、 成骨细胞通过 OPG/RNAKL/M-CSF 调控破骨细胞形成 | 第100-101页 |
| 四、 成骨细胞通过分泌 Wnt 蛋白直接调控破骨细胞形成 | 第101-105页 |
| 第五节 在未成熟的成骨细胞中敲除 WNTLESS 蛋白导致骨髓间充质干细胞（BMSC）维持受损 | 第105-109页 |
| 一、 在未成熟的成骨细胞中敲除 Wntless 导致 BMSC 的维持受损 | 第105-106页 |
| 二、 在成熟的成骨细胞中敲除 Wntless 不影响 BMSC 的维持 | 第106-109页 |
| 第四章 讨论 | 第109-115页 |
| 第一节 WNT 信号通路在骨中调控出生后骨质重塑 | 第109-112页 |
| 一. Wnt 信号通路在骨骼系统中调控骨质重塑 | 第110页 |
| 二. Wnt 信号通路调控成骨生成和破骨生成 | 第110-112页 |
| 第二节 成骨细胞中 WNT 信号通路直接和间接的调控破骨生成 | 第112-113页 |
| 一. Wnt 信号通路分别调控 OPG/RNAKL/M-CSF 间接调控破骨生成 | 第112页 |
| 二. Wnt 信号通路可能直接调控破骨生成 | 第112-113页 |
| 第三节 成骨细胞中 WNT 信号通路维持了 BMSCS 的自我更新 | 第113-115页 |
| 第五章 展望和总结 | 第115-117页 |
| 第一节 总结 | 第115页 |
| 第二节 展望 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-127页 |
| 致谢 | 第127-129页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第129页 |
