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慢病毒载体制备转基因鸡技术平台的建立

摘要第1-6页
Abstract第6-10页
1 引言第10-19页
   ·鸡胚胎的发育第10-11页
   ·禽类胚胎的培养第11-12页
     ·开窗术第12页
     ·代用蛋壳培养体系第12页
   ·制备转基因鸡的方法第12-15页
     ·DNA 显微注射第12-13页
     ·胚胎干细胞法第13页
     ·原始生殖细胞PGCs 法第13-14页
     ·利用逆转录病毒载体法第14-15页
   ·转基因鸡的应用第15-18页
     ·利用转基因鸡做生物反应器第15-17页
     ·在发育生物学中的应用第17页
     ·抗病育种第17-18页
   ·利用慢病毒载体制备转基因鸡的研究现状第18页
   ·本研究的目的、意义和主要内容第18-19页
2 材料与方法第19-36页
   ·材料第19-23页
     ·病毒和细胞系第19-21页
     ·主要试剂第21页
     ·主要设备第21-22页
     ·PCR 引物合成第22页
     ·分析工具软件第22页
     ·试剂的配制第22-23页
   ·实验方法第23-36页
     ·筛选不同鸡场来源的种蛋第23页
     ·鸡胚胎开窗术培养第23-24页
     ·制备显微注射针第24-26页
     ·显微注射机械损伤对胚胎存活率影响研究第26页
     ·293FT 细胞的复苏,传代和冻存第26-27页
     ·病毒滴度的测定第27-28页
     ·向胚下腔中注射慢病毒悬液第28页
     ·原代鸡的饲养与疾病免疫第28-29页
     ·鸡血基因组提取第29-30页
     ·鸡血基因组DNA 的 OD 值测定第30页
     ·鸡血基因组DNA 琼脂糖凝胶电泳检测第30-31页
     ·原代鸡血液基因组PCR 扩增第31-32页
     ·公鸡精液基因组 DNA 的提取与琼脂糖检测第32-33页
     ·鸡精液基因组DNA 的OD 值测定,琼脂糖凝胶电泳检测及 PCR 扩增第33页
     ·PCR 产物的回收与克隆第33-35页
     ·序列测定与分析第35-36页
3 结果与分析第36-44页
   ·不同鸡场来源种蛋的孵化率第36页
   ·不同封口方式的孵化率第36-37页
   ·显微注射机械损伤对种蛋孵化率的研究第37页
   ·慢病毒悬液滴度的荧光照片第37-39页
   ·病毒滴度的计算结果第39页
   ·转基因原代鸡的制备第39页
   ·原代阳性鸡部分组织的荧光图像第39-40页
   ·转基因原代鸡血液基因组 DNA 检测第40-41页
   ·转基因原代鸡血液基因 DNA 的 PCR 扩增第41-42页
   ·精液基因组DNA 提取结果第42-43页
   ·精液基因组DNA 的PCR 扩增第43-44页
4 讨论第44-46页
   ·种蛋质量成功制备转基因鸡的影响第44页
   ·不同封口方式对种蛋孵化率的影响第44页
   ·显微注射对孵化率的影响第44页
   ·利用病毒载体成功制备转基因鸡的关键因素第44-45页
   ·影响注射病毒载体种蛋的孵化率第45页
   ·原代鸡的嵌合率及性腺整合率第45页
   ·下一步的研究工作第45-46页
5 结论第46-47页
参考文献第47-51页
在读期间发表的论文第51-52页
作者简介第52-53页
致谢第53-54页

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