| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 引言 | 第15-20页 |
| 1.1 斑节对虾简介 | 第15页 |
| 1.2 热休克蛋白简介 | 第15-16页 |
| 1.3 甲壳动物热休克蛋白研究进展 | 第16-18页 |
| 1.4 本研究的目的及意义和技术路线 | 第18-20页 |
| 1.4.1 目的及意义 | 第18-19页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 三种热休克蛋白基因的克隆和组织表达 | 第20-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第20页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.3 实验试剂与配制 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-33页 |
| 2.2.1 总RNA提取和cDNA的合成 | 第22-24页 |
| 2.2.2 基因cDNA全长的克隆 | 第24-31页 |
| 2.2.2.1 引物的设计 | 第24-26页 |
| 2.2.2.2 RACE PCR克隆基因 5'和 3'非编码区 | 第26-29页 |
| 2.2.2.3 琼脂糖凝胶回收纯化 | 第29页 |
| 2.2.2.4 连接 | 第29-30页 |
| 2.2.2.5 转化 | 第30页 |
| 2.2.2.6 单克隆选取与菌液检测 | 第30-31页 |
| 2.2.3 序列分析与系统进化树的构建 | 第31页 |
| 2.2.4 组织表达分析 | 第31-33页 |
| 2.3 实验结果 | 第33-44页 |
| 2.3.1 PmHsp60和PmHsp10基因的鉴定与特征 | 第33-35页 |
| 2.3.2 PmHsp60和PmHsp10系统发育分析 | 第35-38页 |
| 2.3.3 PmHsp60和PmHsp10的组织分布 | 第38-39页 |
| 2.3.4 PmGRP94基因的鉴定与特征 | 第39-41页 |
| 2.3.5 PmGRP94系统发育分析 | 第41-43页 |
| 2.3.6 PmGRP94基因的的组织分布 | 第43-44页 |
| 2.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 基因在不同环境应激下的表达分析 | 第46-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第46页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第46页 |
| 3.1.2 实验试剂与配制 | 第46页 |
| 3.2 实验方法 | 第46-47页 |
| 3.2.1 pH应激 | 第46页 |
| 3.2.2 盐度应激 | 第46页 |
| 3.2.3 重金属胁迫 | 第46-47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-53页 |
| 3.3.1 pH应激 | 第47-49页 |
| 3.3.1.1 PmHsp60和PmHsp10在pH应激下的表达 | 第47-48页 |
| 3.3.1.2 PmGRP94在pH应激下的表达 | 第48-49页 |
| 3.3.2 盐度应激 | 第49-51页 |
| 3.3.2.1 PmHsp60和PmHsp10在盐度应激下的表达 | 第49-50页 |
| 3.3.2.2 PmGRP94在盐度应激下的表达 | 第50-51页 |
| 3.3.3 重金属胁迫 | 第51-53页 |
| 3.3.3.1 PmHsp60和PmHsp10在重金属胁迫下的表达 | 第51-53页 |
| 3.3.3.2 PmGRP94在重金属胁迫下的表达 | 第53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-58页 |
| 第四章 基因的重组表达、蛋白纯化 | 第58-70页 |
| 4.1 实验材料 | 第58-59页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第58页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第58页 |
| 4.1.3 实验试剂与配制 | 第58-59页 |
| 4.1.3.1 SDS-PAGE的配制 | 第58-59页 |
| 4.1.3.2 蛋白纯化所需试剂的配制： | 第59页 |
| 4.2 实验方法 | 第59-67页 |
| 4.2.1 总RNA的提取与cDNA的合成 | 第59页 |
| 4.2.2 重组质粒的构建 | 第59-62页 |
| 4.2.2.1 Hsp60和Hsp10基因ORF的获取 | 第59-60页 |
| 4.2.2.2 琼脂糖凝胶回收纯化 | 第60页 |
| 4.2.2.3 质粒与目的基因的双酶切 | 第60-61页 |
| 4.2.2.4 连接 | 第61页 |
| 4.2.2.5 质粒提取 | 第61-62页 |
| 4.2.2.6 重组质粒转化 | 第62页 |
| 4.2.3 蛋白的诱导表达与检测 | 第62-64页 |
| 4.2.3.1 单克隆选取与菌液检测 | 第62页 |
| 4.2.3.2 诱导表达 | 第62-63页 |
| 4.2.3.3 SDS-PAGE检测 | 第63页 |
| 4.2.3.4 蛋白免疫印迹（Western Blotting） | 第63-64页 |
| 4.2.4 蛋白的纯化 | 第64-66页 |
| 4.2.4.1 原理 | 第64-65页 |
| 4.2.4.2 包涵体的制备 | 第65页 |
| 4.2.4.3 纯化步骤 | 第65-66页 |
| 4.2.5 蛋白浓度的测定 | 第66-67页 |
| 4.3 实验结果 | 第67-69页 |
| 4.3.1 PmHsp60和PmHsp10的表达和纯化 | 第67-69页 |
| 4.3.2 蛋白浓度测定标准曲线 | 第69页 |
| 4.4 讨论 | 第69-70页 |
| 第五章 重组蛋白的活性测定 | 第70-75页 |
| 5.1 实验材料 | 第70页 |
| 5.1.1 实验仪器 | 第70页 |
| 5.1.2 实验试剂与配制 | 第70页 |
| 5.2 实验方法 | 第70-72页 |
| 5.2.1 Hsp60 ATPase活性的测定 | 第70-72页 |
| 5.2.1.1 原理 | 第70-71页 |
| 5.2.1.2 步骤 | 第71-72页 |
| 5.2.1.3 计算 | 第72页 |
| 5.2.2 PmHsp60和PmHsp10分子伴侣活性分析 | 第72页 |
| 5.2.2.1 原理 | 第72页 |
| 5.2.2.2 步骤 | 第72页 |
| 5.2.2.3 计算 | 第72页 |
| 5.3 实验结果 | 第72-74页 |
| 5.3.1 Hsp60 ATPase活性 | 第72-73页 |
| 5.3.2 PmHsp60和PmHsp10分子伴侣活性 | 第73-74页 |
| 5.4 讨论 | 第74-75页 |
| 结论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-85页 |
| 附录 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
