| 摘要 | 第6-9页 |
| abstract | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第14-25页 |
| 1.1 课题来源 | 第14页 |
| 1.2 课题研究的目的及意义 | 第14-15页 |
| 1.3 文献综述 | 第15-23页 |
| 1.3.1 根瘤菌共生固氮的过程 | 第15-16页 |
| 1.3.2 活性氧簇化合物在共生固氮中的作用 | 第16-17页 |
| 1.3.3 细菌的抗氧化系统及感受ROS的蛋白 | 第17-20页 |
| 1.3.4 LysR家族蛋白的功能和结构 | 第20-22页 |
| 1.3.5 LsrB蛋白的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4 主要研究内容 | 第23-24页 |
| 1.5 研究的技术路线图 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-40页 |
| 2.1 材料和试剂 | 第25-31页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第25-28页 |
| 2.1.2 PCR引物 | 第28-30页 |
| 2.1.3 细菌菌株生长条件、培养基和抗生素 | 第30页 |
| 2.1.4 试剂盒、化学药品和实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-40页 |
| 2.2.1 质粒提取 | 第31页 |
| 2.2.2 DNA片段回收 | 第31-32页 |
| 2.2.3 工具酶的使用 | 第32页 |
| 2.2.4 热激法转化感受态大肠杆菌 | 第32页 |
| 2.2.5 三亲本接合转移实验 | 第32-33页 |
| 2.2.6 噬菌体转导实验 | 第33-34页 |
| 2.2.7 编码LsrB两个结构域的DNA片段的基因敲除载体的构建 | 第34页 |
| 2.2.8 编码LsrB两个结构域的DNA片段的基因敲除突变体的筛选 | 第34页 |
| 2.2.9 LsrB结构域表达载体的构建 | 第34页 |
| 2.2.10 RNA提取和qRT-PCR | 第34-35页 |
| 2.2.11 蛋白质的表达与纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.12 氧化剂敏感性实验 | 第36页 |
| 2.2.13 植物结瘤实验 | 第36-37页 |
| 2.2.14 蛋白Western杂交 | 第37-39页 |
| 2.2.15 DNA序列分析 | 第39-40页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第40-73页 |
| 3.1 应用缺失突变体分析LsrB蛋白两个结构域的功能 | 第40-49页 |
| 3.1.1 LsrB结构域缺失突变体的构建 | 第40-42页 |
| 3.1.2 LsrB结构域缺失突变体的氧化敏感表型分析 | 第42页 |
| 3.1.3 LsrB的两个结构域在共生互作过程中的作用 | 第42-49页 |
| 3.2 应用过表达技术分析LsrB蛋白两个结构域的功能 | 第49-55页 |
| 3.2.1 表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.2.2 表达菌株的氧化敏感表型分析 | 第50-51页 |
| 3.2.3 表达菌株的结瘤固氮表型分析 | 第51-55页 |
| 3.3 在根瘤菌中对LsrB底物结合结构域表达情况的分析 | 第55-59页 |
| 3.3.1 定量PCR检测编码LsrB底物结合结构域DNA片段的表达 | 第55-56页 |
| 3.3.2 应用蛋白质免疫印迹法分析LsrB底物结合结构域的表达 | 第56-59页 |
| 3.4 在氧化还原状态异常的菌株中表达LsrB的结构域并分析其功能 | 第59-65页 |
| 3.4.1 表达载体的构建 | 第59-60页 |
| 3.4.2 表达LsrB两个结构域对gshA突变体氧化敏感性的影响 | 第60-61页 |
| 3.4.3 表达LsrB两个结构域对gshA突变体共生固氮的影响 | 第61-65页 |
| 3.5 LsrB底物结合结构域半胱氨酸位点的分析 | 第65-71页 |
| 3.5.1 根瘤菌LsrB蛋白半胱氨酸残基的保守性分析 | 第65页 |
| 3.5.2 苜蓿中华根瘤菌中表达田菁根瘤菌LsrB~(V146C)蛋白的氧化敏感性分析 | 第65-67页 |
| 3.5.3 表达田菁根瘤菌LsrB~(V146C)蛋白的苜蓿中华根瘤菌的结瘤固氮分析 | 第67-71页 |
| 3.6 讨论 | 第71-73页 |
| 第四章 结论与展望 | 第73-74页 |
| 4.1 结论 | 第73页 |
| 4.2 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 作者在攻读硕士学位期间公开发表的论文 | 第82-83页 |
| 作者在攻读硕士学位期间所作的项目 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
