| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 主要符号对照表 | 第6-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-35页 |
| 1.1 核糖体 | 第10-15页 |
| 1.1.1 核糖体概述 | 第10页 |
| 1.1.2 核糖体的研究历史 | 第10-11页 |
| 1.1.3 核糖体的结构 | 第11-13页 |
| 1.1.4 核糖体的功能 | 第13-15页 |
| 1.2 核糖体的组装过程 | 第15-23页 |
| 1.2.1 rRNA的转录 | 第15-18页 |
| 1.2.2 rRNA的修饰 | 第18页 |
| 1.2.3 核糖体蛋白的修饰 | 第18-19页 |
| 1.2.4 核糖体亚基的组装 | 第19-23页 |
| 1.3 核糖体组装相关因子 | 第23-24页 |
| 1.4 核糖体组装相关GTP酶 | 第24-27页 |
| 1.4.1 Era | 第24-25页 |
| 1.4.2 RsgA | 第25-26页 |
| 1.4.3 ObgE | 第26页 |
| 1.4.4 YihA | 第26-27页 |
| 1.5 ENGA | 第27-31页 |
| 1.5.1 概述 | 第27页 |
| 1.5.2 EngA的结构 | 第27-29页 |
| 1.5.3 EngA的两个GTP结合结构域 | 第29页 |
| 1.5.4 EngA的功能 | 第29-31页 |
| 1.6 电子显微学 | 第31-33页 |
| 1.6.1 电子显微镜的简介 | 第31-32页 |
| 1.6.2 单颗粒三维重构的基本原理 | 第32-33页 |
| 1.6.3 单颗粒三维重构的新进展 | 第33页 |
| 1.7 本研究的意义 | 第33-35页 |
| 第2章 EngA与核糖体复合物的结构研究 | 第35-70页 |
| 2.1 材料与方法 | 第35-48页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第35-36页 |
| 2.1.2 化学试剂 | 第36页 |
| 2.1.3 宿主和载体 | 第36页 |
| 2.1.4 野生型EngA以及各突变体的表达纯化 | 第36-37页 |
| 2.1.5 大肠杆菌核糖体的提取 | 第37-39页 |
| 2.1.6 共沉淀实验 | 第39页 |
| 2.1.7 电子显微镜样品制备 | 第39-40页 |
| 2.1.8 镀碳膜 | 第40-41页 |
| 2.1.9 冷冻样品制样过程 | 第41-42页 |
| 2.1.10 用电子显微镜收集数据 | 第42-44页 |
| 2.1.11 数据的三维重构 | 第44-45页 |
| 2.1.12 原子模型搭建 | 第45页 |
| 2.1.13 EngA突变体的构建 | 第45-48页 |
| 2.2 实验结果 | 第48-69页 |
| 2.2.1 大肠杆菌EngA蛋白的表达与纯化 | 第48-50页 |
| 2.2.2 50S核糖体的提取 | 第50-52页 |
| 2.2.3 EngA与 50S核糖体的结合 | 第52-53页 |
| 2.2.4 50S?EngA?GMPPNP复合物的结构特征 | 第53-59页 |
| 2.2.5 50S?EngA?GDP复合物的结构特征 | 第59-65页 |
| 2.2.6 用生物化学方法验证EngA和 50S复合物的结构 | 第65-69页 |
| 2.3 本章小结 | 第69-70页 |
| 第3章 EngA与成熟核糖体大亚基的相互作用 | 第70-85页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第70-78页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第70页 |
| 3.1.2 体外翻译实验 | 第70页 |
| 3.1.3 70S核糖体拆分实验 | 第70-71页 |
| 3.1.4 EngA的定点突变和截短 | 第71-76页 |
| 3.1.5 GTP酶活性检测 | 第76-78页 |
| 3.2 实验结果 | 第78-84页 |
| 3.2.1 加入EngA使体外翻译系统的翻译效率降低 | 第78-80页 |
| 3.2.2 EngA不拆分 70S核糖体 | 第80-81页 |
| 3.2.3 his-tag对EngA的影响 | 第81-82页 |
| 3.2.4 50S核糖体使EngA的GTP酶活性增强 | 第82-83页 |
| 3.2.5 EngA的两个GTP结合结构域的GTP酶活性的研究 | 第83-84页 |
| 3.3 本章小结 | 第84-85页 |
| 第4章 EngA与不成熟核糖体大亚基的相互作用 | 第85-97页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第85-89页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第85页 |
| 4.1.2 YM01菌株不成熟核糖体大亚基的提取 | 第85-86页 |
| 4.1.3 BW25113菌株上rrmJ基因的敲除 | 第86-87页 |
| 4.1.4 △rrmJ菌株不成熟核糖体大亚基的提取 | 第87-88页 |
| 4.1.5 Spot assay | 第88页 |
| 4.1.6 Ribosome profile | 第88-89页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第89-96页 |
| 4.2.1 EngA与枯草芽孢杆菌YM01菌株中不成熟核糖体大亚基的相互作用 | 第89-90页 |
| 4.2.2 EngA与大肠杆菌△rrmJ菌株中不成熟核糖体大亚基的相互作用 | 第90-96页 |
| 4.3 本章小结 | 第96-97页 |
| 第5章 讨论与展望 | 第97-103页 |
| 5.1 讨论 | 第97-101页 |
| 5.1.1 EngA在GAD家族中是一个单独的成员 | 第97-99页 |
| 5.1.2 EngA在核糖体组装过程中的作用 | 第99-100页 |
| 5.1.3 EngA有可能在胁迫条件下调节细胞生长 | 第100-101页 |
| 5.2 展望 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-115页 |
| 致谢 | 第115-117页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第117页 |
