| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-24页 |
| 1 光温敏不育系的研究进展 | 第9-15页 |
| 1.1 光照和温度对两用核不育系育性的影响 | 第9-10页 |
| 1.2 光温敏核不育系的分类 | 第10-11页 |
| 1.3 两用核不育系选育的途径与方法 | 第11-12页 |
| 1.4 两用核不育系基因的定位与克隆 | 第12-14页 |
| 1.5 两用核不育系选育存在的问题 | 第14-15页 |
| 2 CRISPR/Cas9介导基因组编辑技术的研究进展 | 第15-23页 |
| 2.1 CRISPR/Cas系统的基本结构 | 第15-16页 |
| 2.2 CRISPR/Cas系统的防御机制 | 第16页 |
| 2.3 CRISPR/Cas系统的发现与类型 | 第16-17页 |
| 2.4 CRISPR/Cas9系统介导的基因编辑 | 第17-20页 |
| 2.5 CRISPR/Cas9系统在植物中的研究进展 | 第20-22页 |
| 2.6 CRISPR/Cas9系统面临的挑战和未来的发展 | 第22-23页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第24-33页 |
| 1 实验材料 | 第24页 |
| 2 主要的试剂及引物 | 第24-25页 |
| 2.1 主要的试剂 | 第24页 |
| 2.2 主要的引物序列 | 第24-25页 |
| 3 载体的构建 | 第25-29页 |
| 3.1 目标序列的设计 | 第25页 |
| 3.2 连接反应 | 第25-26页 |
| 3.3 大肠杆菌转化 | 第26页 |
| 3.4 单克隆菌种的挑取与保存 | 第26页 |
| 3.5 质粒的提取及检测 | 第26-27页 |
| 3.6 酶切反应体系 | 第27-29页 |
| 3.7 农杆菌转化 | 第29页 |
| 4 CRISPR/Cas9的载体遗传转化 | 第29-31页 |
| 4.1 粤泰B愈伤组织的诱导 | 第29-30页 |
| 4.2 共培养菌液的制备 | 第30页 |
| 4.3 共培养和共培养后愈伤的筛选 | 第30页 |
| 4.4 愈伤组织的分化培养 | 第30-31页 |
| 5 转基因植株的检测 | 第31-33页 |
| 5.1 转基因植株的PCR检测 | 第31页 |
| 5.2 HMR检测方法 | 第31-33页 |
| 第三章 结果与分析 | 第33-39页 |
| 1 载体的构建 | 第33-36页 |
| 1.1 目标序列的设计 | 第33页 |
| 1.2 大肠杆菌的转化与质粒的测序 | 第33-34页 |
| 1.3 载体完整性的验证 | 第34-36页 |
| 2 转基因植株的植物组织培养 | 第36页 |
| 3 转基因植株的检测 | 第36-39页 |
| 3.1 PCR检测转基因植株 | 第36-37页 |
| 3.2 T_0代植株靶基因敲除位点初步检测 | 第37-39页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第39-41页 |
| 1 讨论 | 第39-40页 |
| 1.1 CRISPR/Cas9系统对PTGMS2-1 基因定向突变的效果 | 第39页 |
| 1.2 传统的两系不育系的育种方式与CRISPR/Cas9系统介导基因突变的育种方式的优劣 | 第39-40页 |
| 1.3 下一步研究计划 | 第40页 |
| 2 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 附录 主要试剂配方 | 第50-53页 |
