| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-14页 |
| 1.1 α-酮异戊酸概述 | 第7-8页 |
| 1.1.1 α-酮异戊酸 | 第7页 |
| 1.1.2 α-酮异戊酸合成方法 | 第7-8页 |
| 1.2 L-氨基酸脱氨酶研究概述 | 第8-12页 |
| 1.2.1 L-氨基酸脱氨酶的结构 | 第9-10页 |
| 1.2.2 L-氨基酸脱氨酶的转化效率 | 第10-12页 |
| 1.3 分子改造蛋白质研究概述 | 第12页 |
| 1.4 立题依据以及研究意义 | 第12页 |
| 1.5 研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-23页 |
| 2.1 材料 | 第14-17页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第14-15页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第15页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第15-16页 |
| 2.1.4 培养基 | 第16页 |
| 2.1.5 流动相和缓冲液 | 第16-17页 |
| 2.2 方法 | 第17-23页 |
| 2.2.1 分子操作方法 | 第17-18页 |
| 2.2.2 重组菌构建 | 第18-19页 |
| 2.2.3 菌体培养方法及全细胞生物转化剂的制备 | 第19页 |
| 2.2.4 细胞活力测定 | 第19页 |
| 2.2.5 全细胞转化L-缬氨酸生成 α-酮异戊酸 | 第19页 |
| 2.2.6 重组大肠杆菌诱导培养条件优化 | 第19-20页 |
| 2.2.7 重组大肠杆菌全细胞转化条件优化 | 第20-21页 |
| 2.2.8 L-氨基酸脱氨酶结构模型构建及底物对接 | 第21-22页 |
| 2.2.9 定点饱和突变 | 第22页 |
| 2.2.10 HPLC分析方法 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-38页 |
| 3.1 L-氨基酸脱氨酶基因的外源表达 | 第23-25页 |
| 3.1.1 重组菌构建及转化效果 | 第23-24页 |
| 3.1.2 敲除氨基酸转运蛋白提高底物利用率 | 第24-25页 |
| 3.2 L-氨基酸脱氨酶全细胞转化L-缬氨酸反应条件优化 | 第25-27页 |
| 3.2.1 反应pH优化 | 第25-26页 |
| 3.2.2 反应温度优化 | 第26页 |
| 3.2.3 反应体积优化 | 第26-27页 |
| 3.2.4 全细胞生物催化剂浓度优化 | 第27页 |
| 3.3 重组L-氨基酸脱氨酶在E. coli内的高效表达及活性调控 | 第27-32页 |
| 3.3.1 N-端组氨酸标签对蛋白质表达的调控 | 第28页 |
| 3.3.2 诱导剂浓度优化 | 第28-29页 |
| 3.3.3 阶段控温策略诱导L-氨基酸脱氨酶高效表达 | 第29-32页 |
| 3.4 L-氨基酸脱氨酶转化L-缬氨酸关键位点的理论预测 | 第32-35页 |
| 3.4.1 序列比对 | 第32页 |
| 3.4.2 蛋白质结构预测 | 第32-34页 |
| 3.4.3 L-缬氨酸分子对接结果 | 第34-35页 |
| 3.5 L-氨基酸脱氨酶突变体的构建及效果验证 | 第35-38页 |
| 3.5.1 单点饱和突变对转化效果的影响 | 第35-36页 |
| 3.5.2 正向复合突变株的构建和效果 | 第36-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-40页 |
| 主要结论 | 第38-39页 |
| 展望 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第45页 |
