| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 5-氨基乙酰丙酸概况 | 第9-13页 |
| 1.1.1 5-氨基乙酰丙酸简介 | 第9页 |
| 1.1.2 5-氨基乙酰丙酸应用 | 第9-10页 |
| 1.1.3 5-氨基乙酰丙酸的生产方法 | 第10-13页 |
| 1.2 5-氨基乙酰丙酸的生物合成策略 | 第13-15页 |
| 1.2.1 优化天然菌株生产ALA | 第13-14页 |
| 1.2.2 代谢工程方法生产ALA | 第14-15页 |
| 1.3 立题背景与意义 | 第15-16页 |
| 1.4 主要研究内容 | 第16-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第18-19页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 培养基 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-28页 |
| 2.2.1 分子生物学操作 | 第21-23页 |
| 2.2.2 重组质粒的构建 | 第23-25页 |
| 2.2.3 大肠杆菌基因组改造 | 第25-26页 |
| 2.2.4 菌株培养 | 第26页 |
| 2.2.5 分析测定 | 第26-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-43页 |
| 3.1 ALA合酶的选择与表达优化 | 第28-31页 |
| 3.1.1 ALA合酶表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 3.1.2 ALA合酶基因与表达质粒的选择 | 第29页 |
| 3.1.3 hemA的RBS突变库构建与筛选 | 第29-31页 |
| 3.2 sDATEL组装方法的优化与应用 | 第31-35页 |
| 3.2.1 sDATEL的基本原理与特征 | 第31-32页 |
| 3.2.2 sDATEL反应缓冲液的优化 | 第32-34页 |
| 3.2.3 sDATEL的多片段组装能力 | 第34-35页 |
| 3.3 基于sDATEL的辅酶A合成途径重构与优化 | 第35-37页 |
| 3.3.1 基于sDATEL技术表达辅酶A途径基因 | 第35-36页 |
| 3.3.2 摇瓶检验重组质粒表达效果 | 第36-37页 |
| 3.4 5-氨基乙酰丙酸C4合成途径的优化改造 | 第37-43页 |
| 3.4.1 改造前体甘氨酸途径促进ALA合成 | 第38-39页 |
| 3.4.2 改造前体琥珀酸途径促进ALA合成 | 第39-41页 |
| 3.4.3 下调ALA脱水酶基因hemB提高ALA积累量 | 第41-43页 |
| 主要结论与展望 | 第43-45页 |
| 主要结论 | 第43-44页 |
| 展望 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |
