| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 有机磷农药残留现状及其危害 | 第13-14页 |
| 1.1.1 有机磷农药简介 | 第13页 |
| 1.1.2 有机磷农药残留现状 | 第13-14页 |
| 1.1.3 有机磷农药残留危害 | 第14页 |
| 1.2 有机磷农药残留检测技术及应用现状 | 第14-17页 |
| 1.2.1 色谱法 | 第15页 |
| 1.2.2 光谱法 | 第15-16页 |
| 1.2.3 酶抑制法 | 第16页 |
| 1.2.4 免疫分析法 | 第16-17页 |
| 1.3 小分子污染物ELISA检测方法的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3.1 多克隆抗体及单克隆抗体的应用 | 第17-18页 |
| 1.3.2 基因工程抗体的应用 | 第18-19页 |
| 1.4 噬菌体展示技术研究进展及应用 | 第19-21页 |
| 1.4.1 噬菌体展示技术基本原理概述 | 第19页 |
| 1.4.2 噬菌体表面展示文库的类型 | 第19-20页 |
| 1.4.2.1 噬菌体抗体库 | 第19-20页 |
| 1.4.2.2 噬菌体展示随机肽库 | 第20页 |
| 1.4.3 噬菌体展示技术的应用 | 第20-21页 |
| 1.5 单链抗体的研究进展及其应用 | 第21-23页 |
| 1.5.1 单链抗体概述 | 第21页 |
| 1.5.2 单链抗体的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.5.3 单链抗体融合蛋白的应用 | 第22-23页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第23页 |
| 1.7 研究内容 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-43页 |
| 2.1 材料 | 第24-28页 |
| 2.1.1 载体与菌株 | 第24页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第24页 |
| 2.1.3 主要生化试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.5 培养基和试剂的配制 | 第25-28页 |
| 2.1.5.1 培养基的配制 | 第25-26页 |
| 2.1.5.2 实验试剂的配制 | 第26-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-43页 |
| 2.2.1 甲基对硫磷人工抗原的合成 | 第28页 |
| 2.2.2 BALB/C小鼠免疫 | 第28页 |
| 2.2.3 小鼠血清效价检测 | 第28-29页 |
| 2.2.4 甲基对硫磷单克隆抗体的制备 | 第29-31页 |
| 2.2.4.1 杂交瘤细胞的制备与筛选 | 第29-30页 |
| 2.2.4.2 杂交瘤细胞的单克隆化 | 第30页 |
| 2.2.4.3 单克隆抗体的大量制备 | 第30-31页 |
| 2.2.4.4 杂交瘤细胞的冻存 | 第31页 |
| 2.2.5 基于单克隆抗体的直接竞争ELISA检测方法的建立 | 第31-33页 |
| 2.2.5.1 单克隆抗体偶联辣根过氧化物酶 | 第31-32页 |
| 2.2.5.2 抗原抗体最适工作浓度的选择 | 第32页 |
| 2.2.5.3 直接竞争ELISA实验步骤 | 第32页 |
| 2.2.5.4 DC-ELISA分析条件的优化 | 第32-33页 |
| 2.2.6 基于单克隆抗体的间接竞争ELISA检测方法的建立 | 第33-34页 |
| 2.2.6.1 抗原抗体最适工作浓度的选择 | 第33页 |
| 2.2.6.2 间接竞争ELISA实验步骤 | 第33-34页 |
| 2.2.6.3 IC-ELISA分析条件的优化 | 第34页 |
| 2.2.7 基于单克隆抗体的ELISA检测方法的评价 | 第34页 |
| 2.2.7.1 标准抑制曲线的绘制 | 第34页 |
| 2.2.7.2 交叉反应率的测定 | 第34页 |
| 2.2.7.3 样品添加回收实验 | 第34页 |
| 2.2.8 甲基对硫磷单链抗体的制备 | 第34-41页 |
| 2.2.8.1 甲基对硫磷噬菌体抗体库的构建 | 第34-36页 |
| 2.2.8.2 噬菌体抗体库的扩增与噬菌体纯化 | 第36-37页 |
| 2.2.8.3 甲基对硫磷噬菌体抗体库的生物淘选 | 第37页 |
| 2.2.8.4 甲基对硫磷特异性单链抗体的筛选 | 第37-39页 |
| 2.2.8.5 生物素化单链抗体的IC-ELISA | 第39页 |
| 2.2.8.6 单链抗体的大量表达和表达条件优化 | 第39-40页 |
| 2.2.8.7 单链抗体的体外生物素化和纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.9 基于生物素化单链抗体的IC-ELISA检测方法的建立 | 第41-42页 |
| 2.2.9.1 抗原抗体最适工作浓度的选择 | 第41页 |
| 2.2.9.2 IC-ELISA测定的步骤 | 第41页 |
| 2.2.9.3 IC-ELISA分析条件的优化 | 第41-42页 |
| 2.2.10 基于生物素化单链抗体的IC-ELISA检测方法的评价 | 第42-43页 |
| 2.2.10.1 标准抑制曲线的建立 | 第42页 |
| 2.2.10.2 交叉反应率的测定 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-60页 |
| 3.1 甲基对硫磷单克隆抗体的制备及检测方法的建立 | 第43-49页 |
| 3.1.1 甲基对硫磷单克隆抗体的制备 | 第43-44页 |
| 3.1.2 基于单克隆抗体的DC-ELISA检测方法的条件优化 | 第44-45页 |
| 3.1.2.1 离子强度对DC-ELISA检测的影响 | 第44页 |
| 3.1.2.2 pH对DC-ELISA检测的影响 | 第44页 |
| 3.1.2.3 甲醇浓度对DC-ELISA检测的影响 | 第44-45页 |
| 3.1.3 基于单克隆抗体的IC-ELISA检测方法的条件优化 | 第45-46页 |
| 3.1.4 基于甲基对硫磷单克隆抗体的两种检测方法的评价 | 第46-49页 |
| 3.1.4.1 标准抑制曲线的绘制 | 第46-47页 |
| 3.1.4.2 交叉反应率测定 | 第47-49页 |
| 3.1.4.3 样品添加回收实验 | 第49页 |
| 3.2 甲基对硫磷单链抗体的筛选及检测方法的建立 | 第49-60页 |
| 3.2.1 噬菌体抗体库的构建 | 第49-50页 |
| 3.2.2 噬菌体抗体库的生物淘选 | 第50-51页 |
| 3.2.3 单链抗体的筛选 | 第51-52页 |
| 3.2.4 单链抗体的高水平表达和表达条件的优化 | 第52-54页 |
| 3.2.4.1 诱导温度的优化 | 第52-53页 |
| 3.2.4.2 IPTG浓度的优化 | 第53页 |
| 3.2.4.3 诱导时间的优化 | 第53-54页 |
| 3.2.5 单链抗体的体外生物素化、纯化和表征 | 第54-56页 |
| 3.2.5.1 生物素连接酶的表达 | 第54-55页 |
| 3.2.5.2 单链抗体的体外生物素化及纯化 | 第55页 |
| 3.2.5.3 Western blot验证 | 第55-56页 |
| 3.2.6 基于生物素化单链抗体IC-ELISA检测方法的条件优化 | 第56-57页 |
| 3.2.7 基于生物素化单链抗体IC-ELISA检测方法的评价 | 第57-60页 |
| 3.2.7.1 标准抑制曲线的绘制 | 第57-58页 |
| 3.2.7.2 交叉反应率的测定 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 4.1 甲基对硫磷抗体的研究 | 第60页 |
| 4.2 甲基对硫磷单链抗体的研究 | 第60-62页 |
| 4.2.1 亲和素-生物素系统的应用 | 第61页 |
| 4.2.2 噬菌体抗体库淘选方式 | 第61-62页 |
| 4.3 可进行的下一步研究 | 第62-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第73页 |
