| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 概述 | 第10页 |
| 1.2 动物骨骼肌生长发育 | 第10-11页 |
| 1.3 骨骼肌卫星细胞 | 第11-13页 |
| 1.3.1 骨骼肌卫星细胞简介 | 第11-12页 |
| 1.3.2 骨骼肌卫星细胞的分离方法 | 第12-13页 |
| 1.3.3 骨骼肌卫星细胞鉴定 | 第13页 |
| 1.4 PI3K-AKT信号通路及相关基因 | 第13-17页 |
| 1.4.1 AKT家族 | 第14页 |
| 1.4.2 PI3K家族 | 第14页 |
| 1.4.3 PI3K-AKT信号通路的功能 | 第14-16页 |
| 1.4.4 与PI3K-AKT信号通路相关的上下游基因 | 第16-17页 |
| 1.5 RNAi技术的应用 | 第17-19页 |
| 1.5.1 RNAi技术的发现 | 第17-18页 |
| 1.5.2 RNAi的作用机制 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究的目的与意义及主要试验内容 | 第19-20页 |
| 1.6.1 本试验的目的与意义 | 第19-20页 |
| 1.6.2 本试验的主要内容 | 第20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-35页 |
| 2.1 试验动物选择与组织采集 | 第20-21页 |
| 2.2 主要设备及器材 | 第21页 |
| 2.2.1 分子实验主要设备仪器 | 第21页 |
| 2.2.2 细胞培养主要设备和器材 | 第21页 |
| 2.3 主要试剂及配制 | 第21-22页 |
| 2.4 试验方法 | 第22-35页 |
| 2.4.1 耳组织基因组DNA提取 | 第22-23页 |
| 2.4.2 DNA浓度及纯度检测 | 第23-24页 |
| 2.4.3 PIK3CA、AKT3基因变异位点检测 | 第24-25页 |
| 2.4.4 PIK3CA和AKT3基因靶SNPs位点与生长速度关联性分析 | 第25-26页 |
| 2.4.5 新西兰兔SCs分离、纯化及培养 | 第26页 |
| 2.4.6 SCs的鉴定 | 第26-27页 |
| 2.4.7 SCs的传代、冻存和复苏 | 第27-28页 |
| 2.4.8 诱导分化和HE染色 | 第28-29页 |
| 2.4.9 CCK-8试剂盒检测细胞的增殖 | 第29页 |
| 2.4.10 siRNA合成及转染细胞 | 第29-31页 |
| 2.4.11 荧光定量PCR反应检测siRNA对靶基因的抑制效果 | 第31-34页 |
| 2.4.12 数据处理 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-47页 |
| 3.1 基因组DNA提取结果 | 第35页 |
| 3.2 PIK3CA和AKT3基因突变位点的检测和遗传多样性分析 | 第35-38页 |
| 3.2.1 PIK3CA和AKT3基因突变位点的检测 | 第35-36页 |
| 3.2.2 利用PCR-RFLP对突变位点进行基因分型 | 第36-37页 |
| 3.2.3 PIK3CA和AKT3基因遗传多样性分析 | 第37-38页 |
| 3.3 家兔PIK3CA和AKT3基因SNP位点不同基因型与生长速度的相关性 | 第38-40页 |
| 3.4 兔SCs的鉴定 | 第40-42页 |
| 3.4.1 SCs的形态学观察 | 第40-42页 |
| 3.4.2 家兔SCs的免疫组化染色鉴定 | 第42页 |
| 3.5 免疫荧光鉴定siRNA转染效率 | 第42-43页 |
| 3.6 细胞总RNA提取结果 | 第43页 |
| 3.7 筛选下调目的基因表达水平的si-PIK3CA和si-AKT3 | 第43-44页 |
| 3.8 筛选最佳转染浓度 | 第44-45页 |
| 3.9 转染siRNA对SCs细胞增殖的影响 | 第45-46页 |
| 3.9.1 SCs生长曲线绘制 | 第45-46页 |
| 3.9.2 转染siRNA后SCs的增殖能力检测结果 | 第46页 |
| 3.10 转染siRNA后上下游相关基因的相对表达量 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-52页 |
| 4.1 PIK3CA和AKT3基因多态性与家兔生长速度相关 | 第47-49页 |
| 4.1.1 c.3068A>G位点与家兔生长速度相关性 | 第47-48页 |
| 4.1.2 c.1213A>C位点与家兔生长速度相关性 | 第48-49页 |
| 4.2 成功分离、纯化兔SCs细胞 | 第49-50页 |
| 4.3 转染si-PIK3CA-003或si-AKT3-001对上下游基因表达量的影响 | 第50-51页 |
| 4.4 PIK3CA、AKT3基因对细胞增殖的影响 | 第51页 |
| 4.5 PIK3CA、AKT3基因对家兔骨骼肌发育的作用 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 攻读学位期间完成的学术成果 | 第60页 |
