| 缩略词表 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-24页 |
| 1 CSFV的结构和特性 | 第10-11页 |
| 2 CSFV的侵入机制 | 第11页 |
| 3 CSFV的基因组和编码蛋白 | 第11-15页 |
| ·C蛋白 | 第11-12页 |
| ·E~(rns)蛋白 | 第12页 |
| ·E1蛋白 | 第12-13页 |
| ·E2蛋白 | 第13页 |
| ·Npro蛋白 | 第13页 |
| ·p7蛋白 | 第13-14页 |
| ·NS2-3 蛋白 | 第14-15页 |
| ·NS4A、NS4B、NS5A、NS5B蛋白 | 第15页 |
| 4 CSF的实验室诊断 | 第15-18页 |
| ·动物实验 | 第16页 |
| ·病毒分离 | 第16页 |
| ·血清学诊断 | 第16-17页 |
| ·分子生物学诊断 | 第17页 |
| ·细胞检查法 | 第17-18页 |
| 5 CSFV新型疫苗研究进展 | 第18-20页 |
| ·合成肽疫苗 | 第18页 |
| ·亚单位疫苗 | 第18-19页 |
| ·嵌合CSFV疫苗 | 第19页 |
| ·基因缺失型弱毒疫苗 | 第19页 |
| ·DNA疫苗 | 第19-20页 |
| 6 P.pastoris表达系统的一般特征 | 第20-24页 |
| ·外源基因的内在特性的影响 | 第20页 |
| ·宿主菌的选择 | 第20-21页 |
| ·表达载体 | 第21页 |
| ·发酵条件对表达的影响 | 第21-24页 |
| 第二章 CSFV NS2-3 蛋白抗原表位集中区的真核表达与鉴定 | 第24-61页 |
| 1 材料 | 第24-29页 |
| ·质粒和宿主菌 | 第24-25页 |
| ·主要试剂和酶类 | 第25-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·主要试剂配制 | 第26-29页 |
| 2 方法 | 第29-45页 |
| ·CSFV NS2-3_2 基因的PCR扩增、克隆和鉴定 | 第29-31页 |
| ·重组克隆载体的构建 | 第31-34页 |
| ·重组表达质粒p PICZαC-NS2-3_2 的构建 | 第34-37页 |
| ·携带目的基因的重组酵母的构建 | 第37-40页 |
| ·高抗性重组子的初步诱导表达 | 第40页 |
| ·诱导条件的摸索 | 第40-43页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE鉴定 | 第43-44页 |
| ·目的蛋白的Western blotting鉴定 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-55页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第45页 |
| ·重组克隆质粒的转化 | 第45-46页 |
| ·重组克隆质粒的菌液PCR鉴定 | 第46页 |
| ·重组克隆质粒的双酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·CSFV NS2-3_2 和表达载体的连接 | 第47页 |
| ·重组表达质粒p PICZαC-NS2-3_2 的PCR鉴定和双酶切鉴定 | 第47-49页 |
| ·高抗性重组酵母菌的筛选 | 第49-50页 |
| ·高抗性重组酵母菌菌液PCR鉴定 | 第50页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第50-55页 |
| 4 讨论 | 第55-60页 |
| ·密码子偏嗜性 | 第56-58页 |
| ·A+T含量 | 第58页 |
| ·过度糖基化 | 第58-59页 |
| ·目的蛋白的降解 | 第59页 |
| ·甲醇的影响 | 第59页 |
| ·信号肽的影响 | 第59-60页 |
| 5 小结 | 第60-61页 |
| 全文总结 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 攻读学位期间取得的成绩 | 第69-71页 |
| 附录 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
