| 中文摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 符号说明 | 第17-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-32页 |
| ·大肠杆菌中融合蛋白的表达 | 第18-24页 |
| ·大肠杆菌融合蛋白的可溶性表达 | 第19-20页 |
| ·大肠杆菌融合蛋白分泌表达 | 第20-24页 |
| ·信号肽在重组蛋白分泌表达中的作用 | 第24-28页 |
| ·信号肽 | 第25-26页 |
| ·信号肽在大肠杆菌中分泌的应用 | 第26-27页 |
| ·信号肽序列的优化 | 第27-28页 |
| ·利用大肠杆菌转化生物质物质生产生物产品 | 第28-30页 |
| ·纤维素酶系的细胞表面锚定 | 第28-29页 |
| ·纤维素酶系的分泌表达 | 第29-30页 |
| ·外膜缺陷菌 | 第30页 |
| ·论文内容大纲 | 第30-32页 |
| 第二章 Cel-Cd的N端20个氨基酸的性质研究 | 第32-64页 |
| ·导言：本实验的意义、目的及创新点 | 第32-33页 |
| ·材料与方法 | 第33-41页 |
| ·材料 | 第33-36页 |
| ·实验所用基因、载体和菌株 | 第33-34页 |
| ·本实验所使用的引物 | 第34页 |
| ·所使用的酶和试剂盒 | 第34-35页 |
| ·所使用的试剂 | 第35页 |
| ·本研究所使用的培养基 | 第35页 |
| ·所使用的实验软件 | 第35-36页 |
| ·常用试剂盒 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-41页 |
| ·表达载体的构建 | 第36页 |
| ·目的基因的表达 | 第36-37页 |
| ·目的蛋白样品的制备 | 第37页 |
| ·SDS电泳凝胶配制及蛋白检测 | 第37-39页 |
| ·Cel-CD的活性测定 | 第39-40页 |
| ·TEM电镜检测Cel-CD表达菌体 | 第40页 |
| ·随机诱变建库步骤 | 第40页 |
| ·大肠杆菌基因敲除方法 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-61页 |
| ·异源Cel-CD的分泌表达与活性测定 | 第41-43页 |
| ·N20在Cel-CD分泌时起重要作用 | 第43-44页 |
| ·Cel-CD的N端性质检测 | 第44-46页 |
| ·N20与其他Sec途径信号肽的比较 | 第46-47页 |
| ·Cel-CD穿内膜途径的分析 | 第47-48页 |
| ·Cel-CD穿外膜分泌途经的初探 | 第48-50页 |
| ·二型分泌系统(T2SS) | 第48-49页 |
| ·五型分泌系统(T5SS) | 第49页 |
| ·外膜蛋白(OMPs) | 第49-50页 |
| ·N20的随机诱变分析 | 第50-56页 |
| ·胞外蛋白Cel-CD定量初筛 | 第50-52页 |
| ·SDS及活性圈检测筛选最终结果 | 第52-53页 |
| ·突变株N端二级结构预测 | 第53-55页 |
| ·N20氨基酸性质变化对Cel-CD分泌的影响 | 第55-56页 |
| ·N20序列与其他未知分泌途经的分泌蛋白N端的比较 | 第56-61页 |
| ·xyl成熟蛋白的N端与20Cel融合后的分泌检测 | 第57-58页 |
| ·peln成熟蛋白的N端与20Cel融合后的分泌检测 | 第58-60页 |
| ·Cel-CD\PelN\Xyl三个蛋白N端二级结构的比较 | 第60-61页 |
| ·本章小结 | 第61-64页 |
| 第三章 融合蛋白在大肠杆菌中可溶分泌表达的研究 | 第64-79页 |
| ·导言：本实验的意义、目的及创新点 | 第64-65页 |
| ·材料与方法 | 第65-69页 |
| ·材料 | 第65-68页 |
| ·该实验所用菌株和质粒载体 | 第65-66页 |
| ·本实验所使用的异源蛋白相关信息 | 第66页 |
| ·本实验所使用的引物 | 第66-67页 |
| ·所使用的酶和试剂 | 第67页 |
| ·本研究所使用溶液 | 第67-68页 |
| ·常用试剂盒 | 第68页 |
| ·所使用的实验软件 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-69页 |
| ·基因克隆与表达载体的构建 | 第68页 |
| ·目的基因的表达 | 第68-69页 |
| ·目的蛋白样品的制备 | 第69页 |
| ·SDS电泳凝胶配制及蛋白检测 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-77页 |
| ·Cel-CD融合不同来源蛋白的可溶性分泌表达 | 第69-70页 |
| ·N20融合不同来源蛋白的可溶性分泌表达 | 第70-71页 |
| ·Cel-CD与N20融合的效果比较 | 第71-73页 |
| ·分泌量的比较 | 第71-72页 |
| ·N20&Cel融合后胞外积累时间检测 | 第72-73页 |
| ·融合蛋白积累对菌体生长的影响 | 第73-74页 |
| ·融合条件的优化 | 第74-77页 |
| ·培养基优化提高融合蛋白溶解性 | 第74-76页 |
| ·增加N端拷贝数提高信号强度 | 第76-77页 |
| ·本章小结 | 第77-79页 |
| 第四章 Cel-CD作为纤维素酶及融合载体蛋白的双功能应用 | 第79-97页 |
| ·导言：本实验的意义、目的及创新点 | 第79-80页 |
| ·材料与方法 | 第80-84页 |
| ·材料 | 第80-82页 |
| ·本实验所使用的菌株、质粒 | 第80页 |
| ·本实验所使用的引物序列 | 第80-81页 |
| ·本实验所使用的异源蛋白信息 | 第81页 |
| ·本实验所用的酶和试剂 | 第81-82页 |
| ·本实验所用的培养基 | 第82页 |
| ·实验方法 | 第82-84页 |
| ·本实验所用表达载体的构建 | 第82页 |
| ·目的基因的表达 | 第82页 |
| ·目的蛋白样品的制备 | 第82-83页 |
| ·SDS电泳凝胶配制及蛋白检测 | 第83页 |
| ·SDS电泳凝胶配制及蛋白检测 | 第83页 |
| ·Cel-CD的活性测定 | 第83页 |
| ·纤维二糖酶酶活测定 | 第83页 |
| ·PHB分析 | 第83页 |
| ·构建发酵菌株发酵条件 | 第83-84页 |
| ·结果与分析 | 第84-95页 |
| ·Cel-CD融合来源于里氏木霉的Bgl1构建细胞工厂 | 第84-87页 |
| ·活性圈检测 | 第84-85页 |
| ·菌体生长曲线的绘制 | 第85-86页 |
| ·PHB积累 | 第86-87页 |
| ·Cel融合来源于嗜热裂胞菌的Tfu0937构建细胞工厂 | 第87-94页 |
| ·β-葡聚糖苷酶的重新选择 | 第87-88页 |
| ·Tfu0937胞外分泌的检测 | 第88页 |
| ·菌体生长曲线的检测 | 第88-90页 |
| ·融合蛋白的酶活检测 | 第90-91页 |
| ·N20-Tfu以纤维二糖为唯一碳源构建细胞工厂 | 第91-93页 |
| ·Cel-Tfu以CMC为唯一碳源构建细胞工厂 | 第93-94页 |
| ·Cel融合不同来源的水解酶类分泌表达 | 第94-95页 |
| ·本章小结 | 第95-97页 |
| 全文总结 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第110-111页 |
| 附件 | 第111-126页 |
