| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 英文缩略词对照表 | 第8-14页 |
| 第一部分 文献综述和选题目的以及意义 | 第14-26页 |
| 1 鸡传染性支气管炎概述 | 第14-17页 |
| ·IBV病毒特征 | 第14-15页 |
| ·鸡传染性支气管炎的危害 | 第15-16页 |
| ·鸡传染性支气管炎的防治 | 第16-17页 |
| 2 基因工程抗体研究进展 | 第17-22页 |
| ·基因工程抗体简介 | 第17-18页 |
| ·基因工程抗体表达系统介绍 | 第18-20页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第18-19页 |
| ·酵母表达系统 | 第19页 |
| ·昆虫细胞表达系统 | 第19-20页 |
| ·植物表达系统 | 第20页 |
| ·哺乳类细胞表达系统 | 第20页 |
| ·基因工程抗体在鸡抗体基因方面的相关研究 | 第20-22页 |
| 3 RACE技术研究进展 | 第22-25页 |
| ·RACE的原理和方法 | 第22-23页 |
| ·几种改进的RACE技术 | 第23-25页 |
| ·RACE成功的关键环节 | 第25页 |
| 4 研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 第二部分 实验内容 | 第26-58页 |
| 第一章 鸡IGY抗体基因的扩增 | 第26-42页 |
| 1 实验材料 | 第26-27页 |
| ·实验动物 | 第26页 |
| ·主要生物试剂 | 第26页 |
| ·主要实验器材 | 第26-27页 |
| ·常用试剂的配制 | 第27页 |
| 2 实验方法 | 第27-37页 |
| ·样品的制备 | 第27-28页 |
| ·总RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·鸡抗体基因重链IgY全长序列的获得 | 第29-35页 |
| ·重链基因5'端序列的获得(5'RACE) | 第29-32页 |
| ·重链IgY基因3'端序列的获得(3'RACE) | 第32-33页 |
| ·重链IgY全长序列的拼接 | 第33-35页 |
| ·鸡抗体基因轻链全长序列的扩增及分析 | 第35-37页 |
| ·引物设计 | 第35页 |
| ·反转录 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增 | 第36页 |
| ·序列测定及分析 | 第36-37页 |
| 3 实验结果 | 第37-41页 |
| ·鸡IgY重链5'RACE、3'RACE及全长序列扩增结果 | 第37页 |
| ·鸡IgY重链基因序列分析 | 第37-39页 |
| ·5'RACE序列分析 | 第37-39页 |
| ·3'RACE序列分析 | 第39页 |
| ·重链全长序列分析 | 第39页 |
| ·鸡轻链全长序列扩增结果 | 第39-40页 |
| ·鸡轻链IgL基因序列分析 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 第二章 抗鸡IBV特异性IGY抗体真核表达载体的构建及表达检测 | 第42-58页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| ·实验动物及鸡胚 | 第42页 |
| ·质粒、疫苗株和细胞 | 第42-43页 |
| ·主要生物试剂 | 第43页 |
| ·主要实验器材 | 第43页 |
| ·常用试剂的配制 | 第43-45页 |
| 2 实验方法 | 第45-51页 |
| ·鸡胚接种 | 第45页 |
| ·EID50测定 | 第45页 |
| ·动物实验 | 第45-46页 |
| ·抗体基因的扩增及测序 | 第46-47页 |
| ·引物设计 | 第46页 |
| ·PCR扩增 | 第46页 |
| ·测序分析 | 第46-47页 |
| ·重组真核表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·重组质粒和载体的双酶切 | 第47页 |
| ·目的片段与pcDNA3.1(+)载体的连接转化 | 第47-48页 |
| ·无内毒素质粒的提取及鉴定 | 第48页 |
| ·质粒DNA的浓度测定 | 第48页 |
| ·重组真核质粒的表达 | 第48-50页 |
| ·293T细胞的复苏 | 第48-49页 |
| ·293T细胞的传代培养 | 第49页 |
| ·细胞转染 | 第49-50页 |
| ·重组真核质粒的表达鉴定 | 第50-51页 |
| ·间接免疫荧光检测蛋白的表达 | 第50页 |
| ·RT-PCR检测 | 第50页 |
| ·间接ELISA检测 | 第50-51页 |
| 3 实验结果 | 第51-56页 |
| ·EID50测定结果 | 第51页 |
| ·动物实验结果 | 第51-52页 |
| ·序列扩增结果 | 第52页 |
| ·序列分析结果 | 第52-53页 |
| ·重组载体双酶切和测序结果 | 第53-54页 |
| ·表达蛋白检测结果 | 第54-56页 |
| ·间接免疫荧光染色鉴定鸡抗体基因的表达 | 第54-55页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第55-56页 |
| ·间接ELISA检测结果 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66页 |