| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 缩略词及符号表 | 第8-11页 |
| 一 引言 | 第11-15页 |
| 1 小RNA病毒VP2、VP4蛋白的研究进展 | 第11-13页 |
| ·小RNA病毒概述 | 第11页 |
| ·小RNA病毒VP2 | 第11-12页 |
| ·小RNA病毒VP4 | 第12-13页 |
| 2 鸭病毒性肝炎的概述 | 第13-14页 |
| 3 1型鸭甲肝病毒血清抗体诊断方法 | 第14-15页 |
| 4 选题的目的及意义 | 第15页 |
| 二 试验研究 | 第15-54页 |
| 1 试验材料 | 第15-18页 |
| ·毒株、菌种及鸭胚 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15-16页 |
| ·主要溶液的配制 | 第16-17页 |
| ·基因克隆、表达相关试剂 | 第16-17页 |
| ·Western-blot、蛋白质纯化相关试剂的配制 | 第17页 |
| ·ELISA相关溶液的配制 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| 2 方法 | 第18-29页 |
| ·VP2、VP4基因的克隆、表达 | 第18-26页 |
| ·引物设计 | 第18-19页 |
| ·VP2、VP4基因及蛋白的生物信息学分析 | 第19页 |
| ·DHAV-1病毒增殖及基因组RNA的提取 | 第19页 |
| ·VP2、VP4基因的RT-PCR扩增 | 第19-20页 |
| ·VP2、VP4基因的克隆 | 第20-21页 |
| ·VP2、VP4基因重组原核表达质粒的构建及鉴定 | 第21-23页 |
| ·重组蛋白VP2、VP4的诱导表达及条件优化 | 第23-24页 |
| ·重组蛋白VP2、VP4的鉴定及纯化 | 第24-26页 |
| ·基于VP2、VP4蛋白间接ELISA检测方法的建立 | 第26-29页 |
| ·间接ELISA的基本操作程序 | 第26页 |
| ·抗原的最佳包被浓度和阴阳性血清最佳稀释度的确定 | 第26-27页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第27页 |
| ·最佳包被条件 | 第27页 |
| ·最佳封闭条件确定 | 第27页 |
| ·血清及酶标二抗孵育时间确定 | 第27页 |
| ·显色时间确定 | 第27-28页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第28页 |
| ·重复性试验 | 第28页 |
| ·特异性试验 | 第28页 |
| ·ELISA方法敏感性检测 | 第28页 |
| ·基于VP2、VP4蛋白ELISA检测方法的应用及与基于DHAV-1的ELISA方法符合率计算 | 第28-29页 |
| 3 试验结果 | 第29-49页 |
| ·VP2、VP4基因的克隆、表达 | 第29-37页 |
| ·VP2、VP4的生物信息学分析 | 第29-32页 |
| ·VP2、VP4基因的扩增和克隆 | 第32-33页 |
| ·原核表达重组质粒的构建与鉴定 | 第33-34页 |
| ·VP2、VP4重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第34-36页 |
| ·VP2、VP4重组蛋白的鉴定与纯化 | 第36-37页 |
| ·基于VP2、VP4蛋白的ELISA方法的建立 | 第37-49页 |
| ·抗原的最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第37-38页 |
| ·最佳酶标二抗稀释度 | 第38-39页 |
| ·最佳包被条件 | 第39页 |
| ·最佳封闭液选择 | 第39-40页 |
| ·封闭时间 | 第40-41页 |
| ·最佳血清孵育时间及最佳酶标二抗孵育时间 | 第41页 |
| ·显色时间 | 第41-42页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第42-43页 |
| ·重复性试验 | 第43-44页 |
| ·特异性检验 | 第44-46页 |
| ·敏感性检测 | 第46-47页 |
| ·基于VP2、VP4蛋白ELISA检测方法的应用及与基于DHAV-1的ELISA方法符合率计算 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-54页 |
| ·VP2、VP4基因的克隆表达 | 第49-51页 |
| ·基于VP2、VP4蛋白间接ELISA检测方法的建立 | 第51-54页 |
| 三 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
