| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1 兔瘟概况 | 第11-12页 |
| ·流行病学特点 | 第11页 |
| ·临床症状及病理变化 | 第11-12页 |
| ·临床症状 | 第11-12页 |
| ·病理特点 | 第12页 |
| ·组织病理 | 第12页 |
| 2 RHDV基因组与基因工程疫苗 | 第12-20页 |
| ·RHDV基因组 | 第13页 |
| ·兔瘟基因工程亚单位疫苗及病毒活载体疫苗 | 第13-16页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第13-14页 |
| ·昆虫细胞杆状病毒系统 | 第14页 |
| ·酵母表达系统 | 第14-15页 |
| ·植物表达系统 | 第15页 |
| ·重组病毒表达系统 | 第15-16页 |
| ·核酸疫苗发展概况 | 第16-20页 |
| ·核酸疫苗的概念 | 第16页 |
| ·核酸疫苗的作用机理 | 第16-17页 |
| ·DNA疫苗的结构 | 第17-18页 |
| ·真核表达载体pVAX-1 | 第18页 |
| ·核酸疫苗的优缺点 | 第18-20页 |
| 3 质粒组织分布 | 第20页 |
| 4 研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 兔瘟病毒四川株(Y8504)的分离鉴定 | 第21-27页 |
| 1 材料 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-24页 |
| ·临床症状及病理剖解 | 第21-22页 |
| ·毒株PCR检测 | 第22-24页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·RNA提取 | 第22-23页 |
| ·RNA反转录 | 第23页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第23-24页 |
| ·PCR扩增产物序列分析 | 第24页 |
| 3 结果 | 第24-26页 |
| ·临床症状与剖解变化 | 第24-25页 |
| ·目的基因的RT-PCR扩增与鉴定 | 第25页 |
| ·PCR扩增产物序列分析 | 第25-26页 |
| 4 讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 兔瘟病毒VP60基因重组真核质粒的构建 | 第27-42页 |
| 1 材料 | 第27-29页 |
| ·毒株与载体 | 第27-28页 |
| ·试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-38页 |
| ·目的基因获取 | 第29-32页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·RNA提取 | 第29-30页 |
| ·反转录 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增VP60 | 第31页 |
| ·胶回收 | 第31-32页 |
| ·pMD19-T-VP60质粒的构建 | 第32-35页 |
| ·感受态细胞制备 | 第32页 |
| ·目的基因的T/A连接及转化 | 第32-33页 |
| ·pMD19-T-VP60质粒抽提和酶切检测 | 第33-34页 |
| ·pMD19-T-VP60双酶切 | 第34-35页 |
| ·真核表达质粒pVAXl-VP60的构建 | 第35-38页 |
| ·感受态细胞制备 | 第35页 |
| ·连接转化 | 第35-36页 |
| ·pVAXl-VP60质粒抽提和酶切检测 | 第36-38页 |
| 3 结果 | 第38-40页 |
| ·VP60基因的RT-PCR扩增与鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pMD19-T-VP60的构建与鉴定 | 第39页 |
| ·真核表达质粒pVAX1-VP60的构建与鉴定 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 兔瘟病毒VP60基因真核质粒免疫性研究 | 第42-51页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| ·重组真核表达质粒与载体 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42-43页 |
| ·实验动物 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-46页 |
| ·重组质粒pVAX1-VP60的大量制备 | 第43页 |
| ·重组质粒pVAX1-VP60免疫家兔及抗体检测 | 第43-44页 |
| ·实验分组 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pVAX1-VP60免疫家兔后血清制备 | 第44页 |
| ·抗体检测原理 | 第44页 |
| ·重组质粒免疫家兔后的抗体检测 | 第44页 |
| ·重组质粒pVAXl-VP60在兔体内分布检测 | 第44-45页 |
| ·免疫后采样 | 第44页 |
| ·DNA提取 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pVAX1-VP60的PCR检测 | 第45页 |
| ·免疫保护率 | 第45-46页 |
| ·红细胞凝集实验(HA) | 第45页 |
| ·攻毒实验 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-49页 |
| ·重组质粒pVAX1-VP60免疫家兔特异性抗体检测 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pVAXl-VP60免疫家兔后组织分布 | 第47-48页 |
| ·攻毒实验 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献(References) | 第52-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第58页 |