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翻译调节肿瘤蛋白(TCTP)调节自噬的分子机制

中文摘要第1-10页
Abstract第10-12页
第一章 引言第12-36页
 1 定量蛋白质组学第12-13页
   ·定量蛋白质组学简介第12页
   ·基于质谱的定量蛋白质组学第12页
   ·基于凝胶的定量蛋白质组学第12-13页
 2 人工选择与猪产仔数性状第13-16页
   ·人工选择的印记第14页
   ·猪产仔数性状及候选基因第14-16页
 3 自噬第16-25页
   ·自噬的过程及底物第17-19页
   ·自噬体膜的来源第19-21页
   ·自噬在哺乳动物发育过程中的作用第21-25页
 4 TCTP与生长调控第25-29页
   ·TCTP蛋白结构第25-26页
   ·TCTP的生物学功能第26-29页
 5 VHL与肿瘤发生第29-35页
   ·依赖HIF的VHL缺陷性肿瘤发生第30-32页
   ·不依赖HIF的VHL缺陷性肿瘤发生第32-35页
 6 本论文研究的目的与意义第35-36页
第二章 应用蛋白质组学方法筛选家猪与野猪卵巢差异表达蛋白第36-57页
 1 引言第36-37页
 2 材料与方法第37-41页
   ·猪卵巢样品的收集第37页
   ·蛋白的抽提第37页
   ·蛋白质的染料标记第37页
   ·2-D DIGE第37-38页
   ·DIGE图像分析第38页
   ·胶内酶解第38页
   ·质谱分析第38-39页
   ·半定量PCR分析第39-40页
   ·Western Blot分析第40-41页
 3 实验结果第41-52页
   ·猪卵巢总蛋白的2D-DIGE及其分析第41-45页
   ·胶内酶解以及蛋白点的质谱鉴定第45-50页
   ·蛋白质的分类第50页
   ·差异表达蛋白质的验证第50-52页
 4 讨论第52-56页
 5 小结第56-57页
第三章 TCTP在自噬过程中的作用第57-81页
 1 引言第57-59页
 2 材料与方法第59-65页
   ·实验材料第59页
   ·常用试剂及来源第59页
   ·抗体第59页
   ·载体构建第59-60页
   ·细胞培养第60-61页
   ·动物细胞的瞬时转染第61页
   ·慢病毒转染第61-62页
   ·细胞蛋白质的提取及核质分离第62页
   ·SDS-PAGE第62-63页
   ·Western杂交第63-64页
   ·miRNA干涉及其稳转细胞系的建立第64页
   ·免疫荧光分析第64-65页
   ·颗粒细胞的原代培养第65页
   ·细胞增殖分析第65页
 3 实验结果第65-78页
   ·卵巢内TCTP主要表达在颗粒细胞质以及分泌到卵泡液第65-67页
   ·TCTP的下调抑制细胞生长第67-68页
   ·TCTP通过HIF1上调PGK1的表达从而促进细胞生长第68页
   ·卵巢内细胞自噬主要发生在颗粒细胞第68-71页
   ·细胞核膜参与核自噬体的形成第71-73页
   ·TCTP促进缺氧诱导的细胞自噬第73-75页
   ·TCTP通过AMPK-ULK1通路调节细胞自噬第75-78页
 4 讨论第78-80页
 5 小结第80-81页
第四章 TCTP通过结合VHL调节HIF1活性第81-101页
 1 引言第81-82页
 2 材料与方法第82-88页
   ·实验材料第82页
   ·抗体第82页
   ·总RNA和质粒的提取以及细胞的转染等第82-83页
   ·cDNA模板的制备第83页
   ·载体的构建第83-85页
   ·细胞培养及蛋白质的提取第85页
   ·SDS-PAGE及Western杂交第85-86页
   ·实时定量PCR反应第86页
   ·荧光素酶活性的测定第86页
   ·miRNA干涉及其稳转细胞系的建立第86-87页
   ·GST pull-down第87页
   ·免疫共沉淀(Co-IP)第87页
   ·细胞中检测蛋白的泛素化第87-88页
   ·放线菌酮追踪检测第88页
   ·共定位分析第88页
 3 实验结果第88-97页
   ·TCTP上调HIF1的转录激活活性第88-90页
   ·TCTP与VHL相互作用第90-92页
   ·TCTP与HIF1 α竞争结合于VHL的β结构域第92-94页
   ·TCTP降低VHL蛋白稳定性第94-97页
 4 讨论第97-99页
 5 小结第99-101页
研究总结第101-102页
参考文献第102-114页
中英文对照表第114-115页
在读期间发表论文第115-116页
致谢第116页

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