| 本研究创新点 | 第1-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 第一章 研究背景 | 第15-45页 |
| 1. 酿酒酵母CDC42功能和调控机制概述 | 第15-32页 |
| ·Cdc42功能概述 | 第15-21页 |
| ·Cdc42结构和定位 | 第21-23页 |
| ·Cdc42的调控因子 | 第23-29页 |
| ·Cdc42聚集在极性生长位点的调控 | 第29-32页 |
| 2. septin细胞骨架功能和调控机制概述 | 第32-36页 |
| ·septin结构 | 第32-33页 |
| ·septin组装 | 第33-34页 |
| ·septin的主要功能 | 第34页 |
| ·Cdc42对septin组织的调控 | 第34-36页 |
| 3. 酿酒酵母细胞壁组成及完整性信号通路 | 第36-43页 |
| ·酿酒酵母细胞壁成分及合成 | 第37-40页 |
| ·细胞壁完整性的调控 | 第40-43页 |
| 4. 本课题研究目的、内容及意义 | 第43-45页 |
| ·研究目的 | 第43-44页 |
| ·研究内容 | 第44页 |
| ·研究意义 | 第44-45页 |
| 第二章 Msb1对Cdc42调控机制的研究 | 第45-66页 |
| 1. 实验材料 | 第46-48页 |
| ·实验所用菌株和质粒 | 第46页 |
| ·药品和试剂 | 第46-47页 |
| ·培养基和溶液的配制 | 第47-48页 |
| 2. 实验方法 | 第48-52页 |
| ·GST pull-down实验 | 第48页 |
| ·蛋白质印迹实验 | 第48-49页 |
| ·PCR方法构建突变体 | 第49-50页 |
| ·构建含Boi1、Boi2及其片段的表达克隆 | 第50页 |
| ·基因敲除与修饰 | 第50-51页 |
| ·酵母双杂交检测蛋白相互作用 | 第51-52页 |
| 3. 实验结果 | 第52-63页 |
| ·Msb1定位于细胞表面的极性生长位点 | 第52页 |
| ·Msb1能够与Cdc42在体内形成复合体 | 第52-53页 |
| ·Msb1对Cdc42的调控不依靠GAP活性 | 第53-55页 |
| ·Msb1与Cdc42结合蛋白相互作用的研究 | 第55-61页 |
| ·Msb1与Bem1相互关系的研究 | 第61-63页 |
| 4. 讨论 | 第63-65页 |
| 5. 小结 | 第65-66页 |
| 第三章 Msb1参与的细胞学过程及对Rho1的调控 | 第66-94页 |
| 1. 实验材料 | 第66-69页 |
| ·实验所用菌株和质粒 | 第66-67页 |
| ·药品和试剂 | 第67-68页 |
| ·培养基和溶液的配制 | 第68-69页 |
| 2. 实验方法 | 第69-72页 |
| ·构建含Msb1及其片段的表达克降 | 第69-71页 |
| ·酵母细胞培养和显微观察 | 第71页 |
| ·细胞壁酶处理酿酒酵母细胞壁 | 第71页 |
| ·酿酒酵母细胞核染色 | 第71页 |
| ·酿酒酵母葡聚糖染色 | 第71-72页 |
| ·酿酒酵母几丁质染色 | 第72页 |
| ·酿酒酵母甘露聚糖染色 | 第72页 |
| ·酿酒酵母总蛋白的提取 | 第72页 |
| 3. 实验结果 | 第72-91页 |
| ·Msb1定位结构域的鉴定 | 第72-74页 |
| ·检测Msb1片段对cdc42-201突变体的回补作用 | 第74页 |
| ·过量表达Msb1及其片段造成的细胞缺陷 | 第74-77页 |
| ·过量表达Msb1引起芽体变长机制的研究 | 第77-81页 |
| ·过量表达Msb1造成细胞链的相关机制研究 | 第81-86页 |
| ·Msb1于Rho1在体内可形成复合体 | 第86页 |
| ·过量表达Msb1对rho1突变体的影响 | 第86-90页 |
| ·其它细胞极性调控蛋白对Msb1过量表达造成的细胞缺陷的影响 | 第90-91页 |
| 4. 讨论 | 第91-93页 |
| ·Msb1参与的细胞学过程 | 第91页 |
| ·Msb1对Cdc42与Rho1功能的协调作用 | 第91-92页 |
| ·Msb1片段的不同定位与功能 | 第92-93页 |
| 5. 小结 | 第93-94页 |
| 第四章 通过遗传学方法寻找与Msb1相互作用或功能相关的蛋白 | 第94-103页 |
| 1. 实验材料 | 第94-95页 |
| ·实验所用菌株和质粒 | 第94-95页 |
| ·药品和试剂 | 第95页 |
| ·培养基和溶液的配制 | 第95页 |
| 2. 实验方法 | 第95-96页 |
| ·酵母双杂交筛库 | 第95-96页 |
| ·EMS诱变 | 第96页 |
| 3. 实验结果 | 第96-101页 |
| ·通过酵母双杂交筛选与Msb1相互作用的蛋白 | 第96-97页 |
| ·EMS诱变筛选与msb1△合成致死的基因 | 第97-100页 |
| ·EMS诱变筛选过量表达MSB1致死的突变体 | 第100-101页 |
| 4. 讨论 | 第101-102页 |
| 5. 小结 | 第102-103页 |
| 第五章 筛选与CDC42有遗传学相互作用的基因 | 第103-110页 |
| 1. 实验材料 | 第104-105页 |
| ·实验所用菌株和质粒 | 第104页 |
| ·药品和试剂 | 第104页 |
| ·培养基和溶液的配制 | 第104-105页 |
| 2. 实验方法 | 第105-107页 |
| ·酿酒酵母文库转化 | 第105页 |
| ·酿酒酵母基因组的提取 | 第105-106页 |
| ·酿酒酵母的快速转化 | 第106页 |
| ·酿酒酵母基因敲除及修饰 | 第106-107页 |
| 3. 实验结果 | 第107-108页 |
| 4. 讨论 | 第108-109页 |
| 5. 小结 | 第109-110页 |
| 研究总结与展望 | 第110-113页 |
| 参考文献 | 第113-128页 |
| 在读期间已发表论文 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
