| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| ·植物无融合生殖研究概述 | 第13-16页 |
| ·无融合生殖的概念 | 第13页 |
| ·无融合生殖的类型 | 第13页 |
| ·无融合生殖的机制与研究意义 | 第13-15页 |
| ·龙须草无融合生殖研究概况 | 第15-16页 |
| ·PcG基因研究概述 | 第16-20页 |
| ·PcG基因的发现 | 第16页 |
| ·PcG蛋白的组成 | 第16页 |
| ·PcG介导的转录抑制机制 | 第16-17页 |
| ·植物中的PcG蛋白 | 第17-19页 |
| ·PcG蛋白与无融合生殖 | 第19-20页 |
| ·植物中E(z)基因研究概述 | 第20-23页 |
| ·E(z)基因的结构与功能 | 第20页 |
| ·E(z)基因的作用机制 | 第20-21页 |
| ·E(z)类基因的印迹与调控机制 | 第21-23页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 2 实验材料 | 第24-25页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·质粒与菌株 | 第24-25页 |
| 3 实验方法 | 第25-41页 |
| ·龙须草EbEZ基因及其启动子的克隆 | 第25-34页 |
| ·RACE克隆EbEZ基因cDNA | 第25-29页 |
| ·RNA的提取与纯化 | 第25页 |
| ·反转录合成第一链cDNA | 第25页 |
| ·简并PCR扩增才cDNA片段 | 第25-26页 |
| ·RACE克隆cDNA末端 | 第26-28页 |
| ·cDNA全长的获得 | 第28页 |
| ·DNA全长的获得 | 第28-29页 |
| ·Southern杂交分析 | 第29-30页 |
| ·DNA的提取与纯化 | 第29页 |
| ·DNA酶切与电泳 | 第29页 |
| ·转膜与固定 | 第29页 |
| ·分子杂交 | 第29页 |
| ·洗膜及免疫检测 | 第29-30页 |
| ·Genome Walking克隆EbEZ启动子 | 第30-32页 |
| ·DNA的提取与纯化 | 第30页 |
| ·染色体步移文库的构建 | 第30-31页 |
| ·启动子的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增产物的回收 | 第32页 |
| ·TA克隆 | 第32页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第32页 |
| ·化学转化法转化大肠杆菌感受态细胞 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆的鉴定与测序 | 第33页 |
| ·EbEZ基因生物信息学分析 | 第33-34页 |
| ·基因结构蛋白性质分析 | 第33页 |
| ·系统进化分析 | 第33页 |
| ·启动子顺式作用元件分析 | 第33页 |
| ·启动子CpG岛分析 | 第33-34页 |
| ·龙须草EbEZ基因表达模式分析 | 第34-35页 |
| ·RNA提取及质量检测 | 第34页 |
| ·Real-time PCR分析 | 第34-35页 |
| ·龙须草EbEZ1基因启动子甲基化分析 | 第35-36页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第35页 |
| ·亚硫氢酸盐修饰基因组DNA | 第35页 |
| ·亚硫氢酸盐PCR(Bisulfite Sequencing PCR,BSP) | 第35-36页 |
| ·序列甲基化分析 | 第36页 |
| ·龙须草EbEZ1转基因分析 | 第36-41页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第36-38页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第37页 |
| ·质粒的双酶切 | 第37页 |
| ·重组质粒的获得 | 第37-38页 |
| ·重组农杆菌工程菌株的获得 | 第38-39页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·重组质粒转化农杆菌感受态细胞 | 第38页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第38-39页 |
| ·拟南芥的转化 | 第39-40页 |
| ·拟南芥的种植 | 第39页 |
| ·拟南芥的转化 | 第39页 |
| ·转基因拟南芥的筛选 | 第39-40页 |
| ·水稻的转化 | 第40-41页 |
| ·愈伤的诱导与继代 | 第40页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第40页 |
| ·植株再生与移栽 | 第40-41页 |
| 4 结果与分析 | 第41-61页 |
| ·龙须草EbEZ基因及启动子的克隆 | 第41-51页 |
| ·RACE克隆EbEZ基因 | 第41-44页 |
| ·简并PCR扩增获得EbEZ基因EST序列 | 第41页 |
| ·EbEZ基因5'-RACE及3'-RACE扩增 | 第41-42页 |
| ·EbEZ基因cDNA及DNA的扩增 | 第42-43页 |
| ·Southern杂交分析 | 第43-44页 |
| ·EbEZ基因生物信息学分析 | 第44-48页 |
| ·EbEZ基因cDNA序列及结构分析 | 第44页 |
| ·EbEZ基因DNA序列及结构分析 | 第44-45页 |
| ·EbEZ蛋白结构域分析 | 第45-47页 |
| ·EbEZ基因进化分析 | 第47-48页 |
| ·Genome Walking克隆EbEZ启动子 | 第48-51页 |
| ·构建染色体步移文库 | 第48页 |
| ·染色体步移扩增启动子 | 第48-49页 |
| ·启动子的生物信息学分析 | 第49-51页 |
| ·龙须草EbEZ基因表达模式分析 | 第51-53页 |
| ·RNA提取及反转录 | 第51-52页 |
| ·Real-time PCR结果与分析 | 第52-53页 |
| ·龙须草EbEZ1启动子甲基化分析 | 第53-58页 |
| ·CpG岛预测 | 第53-55页 |
| ·亚硫氢酸盐法分析CpG岛区的甲基化状态 | 第55页 |
| ·EbEZ1启动子CpG岛区甲基化分布 | 第55-58页 |
| ·龙须草EbEZ1转基因分析 | 第58-61页 |
| ·龙须草EbEZ1表达载体的构建 | 第58页 |
| ·龙须草EbEZ1转化拟南芥分析 | 第58-59页 |
| ·龙须草EbEZ1转化水稻分析 | 第59-61页 |
| 5 讨论 | 第61-65页 |
| ·龙须草EbEZ基因的克隆及进化分析 | 第61-62页 |
| ·龙须草EbEZ基因的表达 | 第62页 |
| ·龙须草EbEZ启动子分析 | 第62-63页 |
| ·龙须草EbEZ1甲基化分析 | 第63-64页 |
| ·龙须草EbEZ1功能分析 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 附录一 实验中用到的引物 | 第73-75页 |
| 附录二 常用培养基及溶液配制 | 第75-79页 |
| 附录三 常用实验方法 | 第79-83页 |
| 致谢 | 第83页 |