| 中文摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略词表(ABBREVIATIONS) | 第13-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-32页 |
| ·骨骼肌生长发育的基本过程 | 第14-15页 |
| ·参与骨骼肌生长发育的一些调控因子 | 第15-18页 |
| ·生肌调节因子 | 第15-17页 |
| ·肌细胞增强因子 | 第17-18页 |
| ·骨骼肌中蛋白质合成和分解途径 | 第18-22页 |
| ·泛素-蛋白酶体通路及肌肉特异性泛素连接酶 | 第19页 |
| ·IGF1/P13K/Akt通路 | 第19-20页 |
| ·NF-κB | 第20-21页 |
| ·Myostatin | 第21页 |
| ·其它参与骨骼肌萎缩的信号通路及调控因子 | 第21-22页 |
| ·MuRF基因家族的研究进展及存在问题 | 第22-26页 |
| ·microRNA与肌肉生长发育 | 第26-29页 |
| ·真核生物启动子的研究方法 | 第29-32页 |
| 2. 研究目的与意义 | 第32-33页 |
| 3. 材料与方法 | 第33-52页 |
| ·材料 | 第33-37页 |
| ·试验样品 | 第33-34页 |
| ·基因克隆以及基因多态检测的样品 | 第33页 |
| ·猪基因性状关联分析的DNA样品 | 第33页 |
| ·用于基因染色体定位的DNA样品 | 第33页 |
| ·基因表达差异研究的组织样品 | 第33-34页 |
| ·载体、菌株和细胞 | 第34-35页 |
| ·试验用载体 | 第34-35页 |
| ·试验用菌株 | 第35页 |
| ·试验用细胞系 | 第35页 |
| ·试验用试剂及配制 | 第35-37页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·其他试剂及培养基的配制 | 第36-37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| ·主要分子生物学及统计软件 | 第37页 |
| ·主要数据库及在线分析软件 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-52页 |
| ·基因的的分离 | 第37-39页 |
| ·基因cDNA的克隆 | 第37-38页 |
| ·序列的同源性分析与鉴定 | 第38页 |
| ·引物设计 | 第38页 |
| ·PCR扩增条件 | 第38-39页 |
| ·PCR产物的纯化、克隆与测序 | 第39-42页 |
| ·IMpRH辐射杂种板定位 | 第42页 |
| ·定位引物设计 | 第42页 |
| ·定位引物扩增及其分型方法与数据分析 | 第42页 |
| ·MuRFs基因的mRNA表达分析 | 第42-44页 |
| ·组织和细胞中总RNA提取 | 第42-43页 |
| ·总RNA的反转录 | 第43页 |
| ·扩增反应条件 | 第43-44页 |
| ·数据分析 | 第44页 |
| ·猪MuRF1和MuRF2基因的SNP检测与性状关联分析 | 第44页 |
| ·PCR扩增反应 | 第44页 |
| ·酶切条件 | 第44页 |
| ·基因分型 | 第44页 |
| ·数据统计分析 | 第44页 |
| ·MuRF1及MuRF2基因5’UTR片段的克隆、结构分析及双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第44-47页 |
| ·MuRF1及MuRF2基因启动子片段的克隆 | 第44-45页 |
| ·启动了的转录因子结合位点预测 | 第45页 |
| ·启动子荧光素酶报告基因表达载体的构建 | 第45-47页 |
| ·小鼠FoxO1和FoxO3a基因真核表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·小鼠MuRF1基因3’UTR克隆、潜在microRNA位点预测及荧光素酶报告基因表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·小鼠MuRF1基因3’UTR潜在microRNA位点预测 | 第48页 |
| ·microRNA靶位点验证用荧光素酶报告基因表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·细胞培养和转染 | 第49-52页 |
| ·哺乳动物细胞培养及质粒转染 | 第49-50页 |
| ·质粒转染 | 第50页 |
| ·双荧光素酶活性测定 | 第50页 |
| ·Western Blot用蛋白样品制备 | 第50-52页 |
| 4. 结果 | 第52-76页 |
| ·基因片段的分离、鉴定和序列分析 | 第52-57页 |
| ·猪MuRFs家族基因的克隆 | 第52页 |
| ·猪MuRFs家族基因的序列分析结果 | 第52-56页 |
| ·MuRF1基因的序列分析 | 第52-53页 |
| ·MuRF2基因的序列分析 | 第53-55页 |
| ·MuRF3基因的序列分析 | 第55-56页 |
| ·三个基因的氨基酸序列比对结果 | 第56-57页 |
| ·猪MuRF1基因的染色体定位 | 第57-59页 |
| ·猪MuRFs基因家族的时空表达检测 | 第59-62页 |
| ·总RNA的提取和检测结果 | 第59页 |
| ·猪MuRFs基因的组织表达 | 第59-60页 |
| ·猪MuRF1和MuRF2在长白猪胚胎不同时期肌肉中的表达 | 第60-62页 |
| ·猪MuRF1和MuRF2基因SNP检测及性状关联分析 | 第62-65页 |
| ·MuRF1基因的SNP检测与性状关联分析 | 第62-63页 |
| ·MuRF1基因的SNP检测 | 第62-63页 |
| ·MuRF1基因多态与性状关联 | 第63页 |
| ·MuRF2基因的SNP检测与性状关联分析 | 第63-65页 |
| ·MuRF2基因的SNP检测 | 第63-64页 |
| ·MuRF2基因多态与性状关联 | 第64-65页 |
| ·MuRF1及MuRF2基因启动子片段删减及潜在转录位点分析 | 第65-69页 |
| ·猪MuRF1基因启动子区的克隆 | 第65-66页 |
| ·猪MuRF1基因启动子区转录因子结合位点预测 | 第66页 |
| ·MuRF2基因启动子区的克隆 | 第66-67页 |
| ·MuRF2基因启动子区转录因子结合位点预测 | 第67-68页 |
| ·删减启动子序列双荧光素酶报告系统检测 | 第68-69页 |
| ·Foxo1及Foxo3a超表达后MuRF1基因的表达检测 | 第69-71页 |
| ·作用于MuRF1基因的microRNA预测及验证 | 第71-76页 |
| ·microRNA的预测及小鼠MuRF1 3'UTR的克隆 | 第71-72页 |
| ·双荧光素酶酶报告系统验证预测结果 | 第72-73页 |
| ·Western blot验证预测结果 | 第73-74页 |
| ·肌萎缩状态下miR-29表达分析 | 第74-76页 |
| 5 讨论 | 第76-85页 |
| ·关于利用EST和基因组数据库克隆基因 | 第76-77页 |
| ·关于猪MuRFs基因家族的结构及功能预测 | 第77-78页 |
| ·关于猪MuRF1基因的染色体定位 | 第78页 |
| ·关于猪MuRF1s基因家族的时空表达分析 | 第78-80页 |
| ·关于基因的SNP及性状关联分析 | 第80-81页 |
| ·关于SNP检测与分析 | 第80页 |
| ·猪MuRF1和MuRF2基因SNP与生产性状的关联 | 第80-81页 |
| ·关于MuRF1和MuRF2基因的启动子分析 | 第81-82页 |
| ·关于肌细胞正常分化状态下Foxo1和Foxo3a与MuRF1基因的关系 | 第82-83页 |
| ·关于microRNA靶基因的预测及验证 | 第83-85页 |
| 6 小结 | 第85-87页 |
| ·主要研究结果 | 第85页 |
| ·本研究的创新点与特色 | 第85-86页 |
| ·本研究不足之处及值得进一步研究的问题 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-101页 |
| 在读期间发表的论文 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
