| 中文摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 1. 前言 | 第15-42页 |
| ·课题的提出 | 第15-16页 |
| ·抗坏血酸在植物中的作用 | 第16页 |
| ·植物抗坏血酸的生物合成途径 | 第16-22页 |
| ·D-Man/L-Gal途径 | 第18页 |
| ·半乳糖醛酸途径 | 第18-19页 |
| ·肌醇途径 | 第19-20页 |
| ·古洛糖途径 | 第20页 |
| ·VTC2循环 | 第20-22页 |
| ·植物抗坏血酸的氧化 | 第22-23页 |
| ·植物抗坏血酸的循环再生 | 第23页 |
| ·植物抗坏血酸Smirnoff合成途径关键酶基因的研究进展 | 第23-31页 |
| ·磷酸甘露糖异构酶(PMI:EC 5.3.1.8) | 第23-24页 |
| ·磷酸甘露糖变位酶(PMM:EC 5.4.2.8) | 第24-25页 |
| ·GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GMP:EC 2.7.7.22) | 第25-26页 |
| ·GDP-甘露糖-3’,5’表型异构酶(GME:EC 5.1.3.18) | 第26-27页 |
| ·GDP-L-半乳糖磷酸化酶(GGP:EC 2.7.7.69) | 第27-28页 |
| ·L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶(GPP:EC 3.1.3.25) | 第28-29页 |
| ·L-半乳糖脱氢酶(GalDH:EC 1.1.1.117) | 第29-30页 |
| ·L-半乳糖-1,4-内酯脱氢酶(GLDH:EC 1.3.2.3) | 第30-31页 |
| ·植物抗坏血酸生物合成的调控 | 第31-34页 |
| ·光照 | 第31-32页 |
| ·反馈调控 | 第32页 |
| ·调控因子 | 第32-33页 |
| ·茉莉酸酯 | 第33-34页 |
| ·番茄抗坏血酸代谢研究进展 | 第34-35页 |
| ·抗坏血酸与环境胁迫 | 第35-36页 |
| ·抗坏血酸与植物生长发育 | 第36-38页 |
| ·抗坏血酸调控开花时间 | 第37页 |
| ·抗坏血酸调控叶片衰老 | 第37-38页 |
| ·转基因共抑制 | 第38-40页 |
| ·基因芯片技术在植物研究上的应用 | 第40-41页 |
| ·基因芯片的原理 | 第40页 |
| ·基因芯片技术在植物研究上的应用 | 第40-41页 |
| ·本研究的目的和内容 | 第41-42页 |
| 2 材料与方法 | 第42-55页 |
| ·植物材料 | 第42页 |
| ·菌株、载体和试剂 | 第42页 |
| ·DNA抽提及Southern杂交 | 第42页 |
| ·RNA抽提及反转录 | 第42-43页 |
| ·基因克隆及序列分析 | 第43-44页 |
| ·遗传转化载体的构建与遗传转化 | 第44-45页 |
| ·超量表达载体的构建 | 第44页 |
| ·遗传转化 | 第44-45页 |
| ·亚细胞定位分析 | 第45-47页 |
| ·SlGMEs亚细胞定位载体的构建 | 第45-47页 |
| ·目标蛋白瞬时表达于洋葱表皮细胞 | 第47页 |
| ·转基因番茄植株的分子检测 | 第47-48页 |
| ·番茄转化植株的PCR检测 | 第47-48页 |
| ·番茄转化植株的Southern杂交检测 | 第48页 |
| ·RT-PCR及Real-time RT-PCR分析 | 第48-49页 |
| ·GMP酶活力的测定方法 | 第49页 |
| ·酶液的提取 | 第49页 |
| ·GMP酶活力的测定 | 第49页 |
| ·抗坏血酸含量的测定 | 第49-50页 |
| ·转基因番茄植株抗非生物逆境分析 | 第50-51页 |
| ·转基因番茄植株抗氧化逆境分析 | 第50-51页 |
| ·转基因番茄植株抗冷性分析 | 第51页 |
| ·转基因番茄材料盐处理条件下的发芽实验 | 第51页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第51页 |
| ·丙二醛含量的测定 | 第51页 |
| ·SlGME2转基因表型变化材料的观察 | 第51-52页 |
| ·表型变化材料的表型观察 | 第51-52页 |
| ·表型变化材料顶端分生组织及茎的石蜡切片观察 | 第52页 |
| ·表型变化材料茎的透射电镜观察 | 第52页 |
| ·表型变化材料喷施外源抗坏血酸溶液 | 第52页 |
| ·SlGMP干涉转基因材料表型变化的观察及相关分析 | 第52-53页 |
| ·死亡细胞的原位检测 | 第52页 |
| ·H_2O_2的原位检测 | 第52-53页 |
| ·光合速率的测定 | 第53页 |
| ·SlGMP干涉转基因植株中防御系统及抗氧化系统的分析 | 第53页 |
| ·数据分析 | 第53页 |
| ·转基因植株的基因表达谱分析 | 第53-54页 |
| ·芯片差异表达基因在转基因番茄中的表达分析 | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-112页 |
| ·SlGMEs基因的克隆与功能分析 | 第55-88页 |
| ·SlGMEs基因的克隆与序列分析 | 第55-58页 |
| ·SlGMEs在番茄各组织中的表达模式分析 | 第58-59页 |
| ·SlGMEs亚细胞定位分析 | 第59-60页 |
| ·SlGMEs超量表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·pBGME1及pBGME2遗传转化材料的获得及检测 | 第61-63页 |
| ·SlGMEs超量表达转基因植株抗坏血酸含量的分析 | 第63-64页 |
| ·SlGMEs超量表达番茄中抗坏血酸合成相关基因的表达分析 | 第64-67页 |
| ·叶片中抗坏血酸合成相关基因的表达分析 | 第64-65页 |
| ·破色期果实中抗坏血酸合成相关基因的表达分析 | 第65-67页 |
| ·SlGMEs超量表达转基因番茄植株抗逆性分析 | 第67-71页 |
| ·SlGMEs超量表达转基因植株抗氧化逆境鉴定 | 第67-68页 |
| ·SlGMEs超量表达转基因植株抗冷性分析 | 第68-70页 |
| ·SlGMEs超量表达转基因材料抗盐性分析 | 第70-71页 |
| ·SlGMEs超量表达转基因番茄株系破色期果实的基因表达谱分析 | 第71-76页 |
| ·SlGME2正义转基因材料中出现表型变化的株系 | 第76-78页 |
| ·SlGMEs表型改变的转基因番茄材料的细胞学观察 | 第78-80页 |
| ·石蜡切片观察 | 第78-80页 |
| ·茎的透射电镜观察 | 第80页 |
| ·表型变化转基因番茄株系中SlGMEs基因的表达分析 | 第80-82页 |
| ·SlGMEs共抑制番茄植株抗坏血酸含量的分析 | 第82-84页 |
| ·SlGMEs共抑制番茄材料AsA合成相关基因的表达分析 | 第84-85页 |
| ·外源喷施抗坏血酸使表型改变的植株表型恢复正常 | 第85-86页 |
| ·SlGMEs共抑制番茄材料对氧化逆境的反应 | 第86-88页 |
| ·SlGMP基因的功能鉴定 | 第88-106页 |
| ·SlGMP在番茄各组织中的表达情况 | 第88页 |
| ·SlGMP正义及干涉番茄转化材料的获得及分子鉴定 | 第88-90页 |
| ·SlGMP正义及干涉转基因番茄材料中目标基因的表达情况 | 第90-91页 |
| ·SlGMP正义及干涉转基因番茄材料GMP酶活力的分析 | 第91页 |
| ·SlGMP正义及干涉转基因番茄中抗坏血酸含量的分析 | 第91-92页 |
| ·SlGMP正义及干涉转基因番茄中AsA合成相关基因的表达分析 | 第92-93页 |
| ·SlGMP超量表达转基因番茄提高对氧化逆境的抗性 | 第93-94页 |
| ·SlGMP超量表达转基因番茄的基因表达谱分析 | 第94-101页 |
| ·差异表达基因分类 | 第95-97页 |
| ·上调表达基因分析 | 第97-100页 |
| ·破色及红熟果实中共同下调表达基因分析 | 第100-101页 |
| ·部分芯片差异表达基因的Real-time RT-PCR验证分析 | 第101-102页 |
| ·SlGMP干涉转基因材料表型的观察及分析 | 第102-106页 |
| ·SlGMP干涉转基因材料叶片自发形成褐斑 | 第102页 |
| ·SlGMP干涉转基因材料叶片积累活性氧 | 第102-103页 |
| ·SlGMP干涉转基因番茄诱导了防御反应相关基因的表达 | 第103-104页 |
| ·SlGMP干涉转基因番茄中部分抗氧化酶基因上调表达 | 第104-105页 |
| ·SlGMP干涉转基因番茄光合能力降低 | 第105-106页 |
| ·在番茄中超量表达草莓GalUR基因的研究 | 第106-112页 |
| ·FaGalUR基因的克隆 | 第106-107页 |
| ·草莓GalUR正义表达载体的构建 | 第107页 |
| ·FaGalUR正义番茄转化材料的获得及分子检测 | 第107-108页 |
| ·FaGalUR正义转基因番茄材料的表达分析 | 第108-109页 |
| ·FaGalUR正义转基因番茄材料抗坏血酸含量的分析 | 第109页 |
| ·FaGalUR正义转基因番茄材料抗盐性分析 | 第109-110页 |
| ·番茄GalUR可能的候选基因 | 第110-112页 |
| 4. 讨论 | 第112-119页 |
| ·SlGME1与SlGME2基因的比较 | 第112页 |
| ·SlGMP基因功能的探讨 | 第112-114页 |
| ·SlGMP调控抗坏血酸含量 | 第112-113页 |
| ·抑制SlGMP基因的表达可诱导细胞死亡及病害防御反应 | 第113-114页 |
| ·番茄中抗坏血酸合成途径的探讨 | 第114-116页 |
| ·番茄中抗坏血酸Smorniff合成途径 | 第114-115页 |
| ·番茄中抗坏血酸合成半乳糖醛酸途径的探讨 | 第115-116页 |
| ·抗坏血酸调控植株生长发育的探讨 | 第116-117页 |
| ·抗坏血酸与非生物逆境 | 第117页 |
| ·本研究的创新点 | 第117页 |
| ·未来研究的设想 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 附录 | 第135-149页 |
| 附录一: 植物总RNA提取及反转录程序 | 第135-136页 |
| 附录二: 用于芯片杂交的番茄果实RNA提取 | 第136-137页 |
| 附录三: 质粒DNA的碱裂解提取方法 | 第137-138页 |
| 附录四: 电击法转化农杆菌 | 第138-139页 |
| 附录五: Southern杂交程序 | 第139-142页 |
| 附录六: 石蜡切片的制作程序 | 第142-144页 |
| 附录七: 登录基因信息 | 第144-148页 |
| 附录八: 载体质粒图 | 第148-149页 |
| 附录九: 在读期间发表论文 | 第149页 |
