| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号、变量、缩略词 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| ·脂质 | 第12页 |
| ·脂肪酶 | 第12-18页 |
| ·脂肪酶的定义 | 第12页 |
| ·脂肪酶的来源 | 第12-13页 |
| ·脂肪酶的性质 | 第13-14页 |
| ·脂肪酶的结构 | 第14页 |
| ·脂肪酶的催化机理 | 第14-15页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第15-18页 |
| ·脂肪酶热稳定性改造的研究进展 | 第18-26页 |
| ·脂肪酶热稳定性的衡量 | 第18页 |
| ·脂肪酶热稳定性影响因素 | 第18-19页 |
| ·脂肪酶热稳定性相关分析软件 | 第19-20页 |
| ·耐热脂肪酶的高通量筛选方法 | 第20-22页 |
| ·定向进化提高脂肪酶热稳定性 | 第22-24页 |
| ·定点突变提高脂肪酶热稳定性 | 第24-26页 |
| ·论文的立题依据及主要研究内容 | 第26-28页 |
| ·立题依据和研究意义 | 第26-27页 |
| ·论文的主要研究内容 | 第27-28页 |
| 第二章 圆弧青霉三脂酰甘油脂肪酶在毕赤酵母中的表达 | 第28-45页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·材料与方法 | 第28-36页 |
| ·主要仪器及生产厂家 | 第28页 |
| ·菌种、质粒和主要试剂 | 第28-29页 |
| ·生物信息学相关网站和分析软件 | 第29页 |
| ·培养基及相关溶液的配制 | 第29-30页 |
| ·PcLipI 基因 cDNA 序列的克隆 | 第30-32页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第32-34页 |
| ·重组毕赤酵母的构建及筛选 | 第34页 |
| ·重组毕赤酵母初步诱导产酶 | 第34页 |
| ·rePcLipI 的活性测定 | 第34-35页 |
| ·rePcLipI 的纯化 | 第35页 |
| ·rePcLipI 的蛋白质分析 | 第35页 |
| ·rePcLipI 部分酶学性质分析 | 第35-36页 |
| ·重组毕赤酵母产酶条件的初步优化 | 第36页 |
| ·重组毕赤酵母产酶条件的正交实验 | 第36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-44页 |
| ·PcLipI 基因全长 cDNA 序列的克隆 | 第36页 |
| ·重组表达质粒的构建与转化 | 第36-37页 |
| ·重组毕赤酵母 GSL 的 PCR 鉴定 | 第37-38页 |
| ·初步表达产物的酶活性测定 | 第38-39页 |
| ·纯化表达产物的蛋白质分析 | 第39页 |
| ·rePcLipI 部分酶学性质 | 第39-41页 |
| ·表达条件的初步优化 | 第41-43页 |
| ·表达条件的正交实验 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章 圆弧青霉三脂酰甘油脂肪酶的热稳定性改造 | 第45-58页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·材料与方法 | 第45-49页 |
| ·主要仪器及生产厂家 | 第45页 |
| ·菌种、质粒及试剂 | 第45-46页 |
| ·常用的生物信息学软件及网站 | 第46页 |
| ·主要培养基及相关溶液的配制 | 第46页 |
| ·PcLipI 三维结构分析 | 第46页 |
| ·潜在二硫键的计算机预测 | 第46页 |
| ·脂肪酶热稳定性的计算机预测 | 第46页 |
| ·突变脂肪酶基因的构建 | 第46-48页 |
| ·PcLipI 及其突变子基因在大肠杆菌中的表达 | 第48页 |
| ·PcLipI 及其突变子基因在毕赤酵母中的表达 | 第48页 |
| ·重组 PcLipI 及其突变子的纯化 | 第48-49页 |
| ·重组 PcLipI 及其突变子的酶活性及蛋白分析 | 第49页 |
| ·重组 PcLipI 及其突变子的部分酶学特性分析 | 第49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-57页 |
| ·PcLipI 的三维结构分析 | 第49-50页 |
| ·计算机辅助预测潜在的二硫键位点 | 第50-51页 |
| ·拟突变 PcLipI 的热稳定性预测 | 第51-53页 |
| ·PcLipI 突变基因的获得及其表达 | 第53页 |
| ·重组 PcLipI 突变子的蛋白质分析 | 第53-54页 |
| ·重组 PcLipI 及其突变子的部分酶学特性 | 第54-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 圆弧青霉单双脂酰甘油脂肪酶在毕赤酵母中的表达 | 第58-73页 |
| ·引言 | 第58页 |
| ·材料与方法 | 第58-62页 |
| ·主要仪器及生产厂家 | 第58页 |
| ·菌种、质粒及试剂 | 第58页 |
| ·常用的生物信息学软件及网站 | 第58页 |
| ·主要培养基及相关溶液的配制 | 第58页 |
| ·引物的设计与合成 | 第58-59页 |
| ·PcMdl 完整 cDNA 的克隆 | 第59页 |
| ·PcMdl 成熟肽编码基因的克隆 | 第59-60页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第60页 |
| ·重组毕赤酵母的构建、筛选与初步表达 | 第60页 |
| ·重组毕赤酵母表达条件的优化 | 第60页 |
| ·rePcMdl 的纯化 | 第60-61页 |
| ·rePcMdl 酶活性 | 第61页 |
| ·rePcMdl 底物专一性初探 | 第61页 |
| ·rePcMdl 的蛋白及糖成分分析 | 第61页 |
| ·rePcMdl 的酶学特性分析 | 第61-62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-72页 |
| ·PcMdl 的 cDNA 克隆 | 第62-64页 |
| ·PcMdl 成熟肽一级结构分析 | 第64页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第64页 |
| ·毕赤酵母 GS115 的转化、筛选与初步表达 | 第64-66页 |
| ·重组子表达条件的优化 | 第66-69页 |
| ·rePcMdl 的纯化与去糖基化分析 | 第69-70页 |
| ·rePcMdl 的部分酶学特性 | 第70-72页 |
| ·本章小结 | 第72-73页 |
| 第五章 圆弧青霉单双脂酰甘油脂肪酶底物专一性的分子基础 | 第73-79页 |
| ·引言 | 第73页 |
| ·材料与方法 | 第73-74页 |
| ·主要设备 | 第73页 |
| ·常用的生物信息学软件及网站 | 第73页 |
| ·PcMdl 非活性状态的构建 | 第73-74页 |
| ·PcMdl 活性状态的构建 | 第74页 |
| ·底物类似物的获取及与 PcMdl 的对接 | 第74页 |
| ·PcMdl 与底物类似物复合物的 MD 分析 | 第74页 |
| ·结果与讨论 | 第74-78页 |
| ·PcMdl 非活性三级结构分析 | 第74-75页 |
| ·PcMdl 活性状态的构建 | 第75-76页 |
| ·底物类似物的获取及与 PcMdl 的对接 | 第76页 |
| ·PcMdl 底物专一性的分子基础 | 第76-78页 |
| ·本章小结 | 第78-79页 |
| 第六章 三脂酰甘油脂肪酶与单双脂酰甘油脂肪酶对脂质的共同水解 | 第79-86页 |
| ·引言 | 第79页 |
| ·材料与方法 | 第79-81页 |
| ·主要仪器及生产厂家 | 第79页 |
| ·主要试剂 | 第79页 |
| ·重组圆弧青霉脂肪酶的制备 | 第79页 |
| ·rePcLip~C和 rePcMdl 共同水解油脂的影响因素 | 第79-80页 |
| ·脂肪酶共同水解橄榄油 | 第80页 |
| ·水解三丁酰甘油酯的过程分析 | 第80-81页 |
| ·结果与讨论 | 第81-85页 |
| ·圆弧青霉脂肪酶共同水解油脂的影响因素 | 第81-82页 |
| ·脂肪酶共同水解橄榄油 | 第82-83页 |
| ·油脂水解的过程分析 | 第83-85页 |
| ·本章小结 | 第85-86页 |
| 主要结论与展望 | 第86-88页 |
| 主要结论 | 第86-87页 |
| 展望 | 第87-88页 |
| 论文主要创新点 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-98页 |
| 附录: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第98页 |
