| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-28页 |
| ·木聚糖 | 第13-14页 |
| ·木聚糖酶 | 第14-16页 |
| ·木聚糖酶的定义 | 第14页 |
| ·木聚糖酶的分类 | 第14页 |
| ·木聚糖酶的结构域 | 第14-16页 |
| ·木聚糖酶的催化机制 | 第16页 |
| ·GHF11 木聚糖酶的结构与功能特性 | 第16-19页 |
| ·GHF11 木聚糖酶的基本结构特点 | 第16-17页 |
| ·GHF11 木聚糖酶的酶学性质 | 第17-19页 |
| ·GHF11 木聚糖酶热稳定性的研究进展 | 第19-23页 |
| ·影响 GHF11 木聚糖酶热稳定性的因素 | 第19-21页 |
| ·GHF11 木聚糖酶热稳定性的分子改造 | 第21-23页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第23-26页 |
| ·食品工业 | 第23-24页 |
| ·医药工业 | 第24页 |
| ·饲料工业 | 第24页 |
| ·造纸工业 | 第24-25页 |
| ·生物燃料 | 第25页 |
| ·其它工业 | 第25-26页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第26-27页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第27-28页 |
| 第二章 木聚糖酶基因 Ausxyn11D 的克隆及在 P. pastoris 中的表达 | 第28-52页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·材料与方法 | 第28-31页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·菌种和试剂 | 第29页 |
| ·培养基与主要溶剂配制 | 第29-30页 |
| ·PCR 引物 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-40页 |
| ·总 RNA 及基因组 DNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·Ausxyn11D 完整 cDNA 序列的克隆 | 第32-33页 |
| ·Ausxyn11D DNA 序列的克隆 | 第33-35页 |
| ·重组克隆质粒的构建、转化及鉴定 | 第35-36页 |
| ·Ausxyn11D 基因序列及 AusXyn11D 氨基酸序列的分析 | 第36页 |
| ·成熟肽基因的克隆及重组表达质粒的构建 | 第36-38页 |
| ·重组毕赤酵母的构建、筛选与表达 | 第38页 |
| ·表达产物的鉴定与分析 | 第38-39页 |
| ·重组木聚糖酶的分离纯化 | 第39页 |
| ·酶学性质测定 | 第39-40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-50页 |
| ·Ausxyn11D 完整 cDNA 序列的克隆 | 第40-41页 |
| ·Ausxyn11D DNA 序列的克隆 | 第41-42页 |
| ·Ausxyn11D 基因序列的分析 | 第42-43页 |
| ·AusXyn11D 氨基酸序列的分析 | 第43-45页 |
| ·AusXyn11D 成熟肽基因的克隆 | 第45-46页 |
| ·Ausxyn11D 在 P. pastoris GS115 中的异源表达 | 第46-47页 |
| ·reAusXyn11D 的分离纯化 | 第47-48页 |
| ·reAusXyn11D 酶学性质的分析 | 第48-50页 |
| ·本章小结 | 第50-52页 |
| 第三章 木聚糖酶基因 Ausxyn11A 在 P. pastoris 中的表达 | 第52-67页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·菌种和试剂 | 第52-53页 |
| ·培养基与主要溶剂配制 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-56页 |
| ·成熟肽基因 Ausxyn11A 的克隆 | 第53-54页 |
| ·重组表达质粒 pPIC9KM-Ausxyn11A 的构建 | 第54页 |
| ·GS115/Ausxyn11A 的构建、筛选及表达 | 第54页 |
| ·表达产物的鉴定与分析 | 第54页 |
| ·GS115/Ausxyn11A 诱导表达条件优化 | 第54-55页 |
| ·reAusXyn11A 的分离纯化 | 第55-56页 |
| ·酶学性质测定 | 第56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-66页 |
| ·成熟肽基因 Ausxyn11A 的克隆 | 第56-57页 |
| ·pPIC9KM-Ausxyn11A 的构建 | 第57页 |
| ·GS115/Ausxyn11A 的构建、筛选及表达 | 第57-58页 |
| ·GS115/Ausxyn11A 诱导表达条件优化 | 第58-61页 |
| ·reAusXyn11A 的分离纯化 | 第61-63页 |
| ·reAusXyn11A 酶学性质的分析 | 第63-66页 |
| ·本章小结 | 第66-67页 |
| 第四章 耐热木聚糖酶基因 AExynM 和 Syxyn11 的构建及表达 | 第67-86页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·实验材料 | 第67-68页 |
| ·主要仪器 | 第67-68页 |
| ·菌种和试剂 | 第68页 |
| ·培养基与主要溶剂配制 | 第68页 |
| ·生物信息学分析软件 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-73页 |
| ·序列比对 | 第68页 |
| ·同源建模 | 第68-69页 |
| ·MD 模拟 | 第69页 |
| ·重组质粒 pUCm-T-Syxyn11 的构建 | 第69-70页 |
| ·杂合酶基因 AExynM 的构建 | 第70-72页 |
| ·重组表达质粒 pPIC9KM-AExynM、pPIC9KM-Syxyn11 的构建 | 第72页 |
| ·GS115/AExynM、GS115/Syxyn11 的构建、筛选及表达 | 第72页 |
| ·表达产物的鉴定与分析 | 第72-73页 |
| ·reAEXynM 和 reSyXyn11 的分离纯化 | 第73页 |
| ·酶学性质测定 | 第73页 |
| ·结果与讨论 | 第73-85页 |
| ·同源性分析 | 第73-74页 |
| ·MD 模拟 | 第74-76页 |
| ·杂合酶基因 AExynM 的构建 | 第76-78页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第78页 |
| ·毕赤酵母重组子的构建、筛选及表达 | 第78-79页 |
| ·重组木聚糖酶的分离纯化 | 第79-81页 |
| ·酶学性质的分析 | 第81-85页 |
| ·本章小结 | 第85-86页 |
| 第五章 杂合木聚糖酶 AEXynM 耐热机制的分析 | 第86-96页 |
| ·引言 | 第86页 |
| ·实验材料 | 第86-87页 |
| ·主要仪器 | 第86页 |
| ·菌种和试剂 | 第86页 |
| ·培养基与主要溶剂配制 | 第86页 |
| ·生物信息学分析软件 | 第86-87页 |
| ·实验方法 | 第87-89页 |
| ·突变位点的分析 | 第87页 |
| ·同源建模 | 第87页 |
| ·MD 模拟 | 第87页 |
| ·突变酶基因的构建 | 第87-88页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第88页 |
| ·毕赤酵母重组子的构建、筛选及表达 | 第88页 |
| ·表达产物的鉴定与分析 | 第88-89页 |
| ·重组木聚糖酶的分离纯化 | 第89页 |
| ·酶学性质测定 | 第89页 |
| ·结果与讨论 | 第89-95页 |
| ·突变位点的确定 | 第89-90页 |
| ·杂合酶 AEXynM 3-D 结构的分析 | 第90-91页 |
| ·突变酶基因的构建 | 第91页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第91-92页 |
| ·毕赤酵母重组子的构建、筛选及表达 | 第92-93页 |
| ·重组木聚糖酶的分离纯化 | 第93页 |
| ·酶学性质的分析 | 第93-95页 |
| ·本章小结 | 第95-96页 |
| 第六章 耐热木聚糖酶 AEXynM 在制备低聚木糖中的应用 | 第96-108页 |
| ·引言 | 第96页 |
| ·实验材料 | 第96-97页 |
| ·主要仪器 | 第96页 |
| ·主要试剂 | 第96-97页 |
| ·主要溶剂配制 | 第97页 |
| ·实验方法 | 第97-99页 |
| ·可溶性总糖的测定 | 第97页 |
| ·还原糖的测定 | 第97页 |
| ·玉米芯木聚糖的制备 | 第97-98页 |
| ·AEXynM 水解条件优化 | 第98页 |
| ·水解产物分析 | 第98-99页 |
| ·结果与讨论 | 第99-106页 |
| ·玉米芯木聚糖的制备 | 第99页 |
| ·玉米芯木聚糖的酶解条件优化 | 第99-101页 |
| ·桦木木聚糖的酶解条件优化 | 第101-102页 |
| ·AEXynM 水解过程的分析 | 第102-103页 |
| ·AEXynM 水解产物的分析 | 第103-106页 |
| ·本章小结 | 第106-108页 |
| 主要结论与展望 | 第108-110页 |
| 主要结论 | 第108-109页 |
| 展望 | 第109-110页 |
| 论文主要创新点 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-120页 |
| 附录: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第120页 |
