| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一章 人溶血磷脂酸受体3(LPAR3)基因的克隆及克隆载体的构建 | 第14-25页 |
| ·实验材料 | 第14-16页 |
| ·主要试剂 | 第14页 |
| ·主要仪器设备 | 第14-15页 |
| ·菌种 | 第15页 |
| ·常用溶液的配制 | 第15-16页 |
| ·方法 | 第16-22页 |
| ·引物的设计 | 第16页 |
| ·模板cDNA的制备 | 第16-18页 |
| ·PCR扩增及胶回收 | 第18-19页 |
| ·pMD19-T-LPAR3的构建、转化和鉴定 | 第19-21页 |
| ·重组质粒pMD19-T-LPAR3的测序鉴定 | 第21-22页 |
| ·结果 | 第22-23页 |
| ·人溶血磷脂酸受体3(LPAR3)基因的PCR扩增 | 第22页 |
| ·重组质粒pMD19-T-LPA3的PCR鉴定 | 第22-23页 |
| ·重组质粒pMD19-T-LPAR3的双酶切鉴定 | 第23页 |
| ·重组质粒pMD19-T-LPAR3的测序鉴定 | 第23页 |
| ·讨论 | 第23-25页 |
| 第二章 人溶血磷脂酸受体(LPAR3)基因真核表达载体的构建 | 第25-31页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·菌种 | 第25-26页 |
| ·质粒 | 第26页 |
| ·常用溶液的配制 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-28页 |
| ·表达载体pIRES2-EGFP的Xho I、BamH I双酶切及胶回收 | 第26-27页 |
| ·重组载体pMD19-T-LPAR3的Xho I、BamH I酶切处理及胶回收 | 第27页 |
| ·重组载体pMD19-T-LPAR3和表达载体pIRES2-EGFP双酶切产物的连接 | 第27-28页 |
| ·重组表达载体pIRES2-EGFP-LPAR3双酶切鉴定 | 第28页 |
| ·重组表达载体plRES2-EGFP-LPAR3的测序鉴定 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-30页 |
| ·表达载体pIRES2-EGFP的Xho I及BamH I双双酶切 | 第28-29页 |
| ·重组载体pMD-19T-LPAR3的Xho I和BamH I双酶切 | 第29页 |
| ·重组表达载体pIRES2-EGFP-LPAR3双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒pIRES2-EGFP-LPAR3的测序鉴定 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 Real Time PCR和显微荧光检测pIRES2-EGFP-LPAR3转染与未传染293T细胞的表达差异 | 第31-42页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31-32页 |
| ·细胞株及质粒 | 第32页 |
| ·常用溶液的配制 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-39页 |
| ·293T细胞的培养 | 第32-34页 |
| ·pIRES2-EGFP空载体质粒及重组pIRES2-EGFP-LPAR3质粒转染293T细胞 | 第34-36页 |
| ·pIRES2-EGFP空载体质粒及重组pIRES2-EGFP-LPAR3质粒转染293T细胞显微荧光照相 | 第36页 |
| ·转基因细胞Total RNA提取 | 第36-38页 |
| ·Real Time PCR检测转染效果 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-41页 |
| ·显微荧光照相 | 第39-40页 |
| ·Real Time PCR相对定量结果 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 在卵巢癌细胞中LPA通过LPAR3诱导HO-8910卵巢癌细胞增殖功能检测 | 第42-55页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·细胞株及质粒 | 第43页 |
| ·溶液配制 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-48页 |
| ·HO-8910细胞的培养 | 第43-44页 |
| ·Real Time PCR检测HO-8910卵巢癌细胞LPAR1-6基础表达 | 第44-45页 |
| ·转基因细胞LPAR3 mRNA表达水平检测 | 第45页 |
| ·MTT细胞数目标准曲线的制作 | 第45-46页 |
| ·LPA梯度刺激HO-8910细胞增殖检测 | 第46页 |
| ·Ki16425预处理细胞增殖检测 | 第46-47页 |
| ·LPAR3转基因细胞LPA刺激细胞增殖检测 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-53页 |
| ·定量检测HO-8910卵巢癌细胞中LPAR1-6基因的表达 | 第48-49页 |
| ·显微荧光照相 | 第49-50页 |
| ·定量检测转染LPAR3转基因后HO-8910卵巢癌细胞LPAR3基因的表达 | 第50-51页 |
| ·HO-8910细胞的标准曲线 | 第51-52页 |
| ·LPA梯度刺激HO-8910细胞增殖检测 | 第52页 |
| ·Ki16425预处理后细胞跟正常未处理细胞增殖检测 | 第52-53页 |
| ·LPAR3转基因细胞LPA诱导下细胞增殖检测 | 第53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-58页 |
| 文献综述 | 第58-65页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| 附录 | 第65-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第69页 |
