| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| ·漆酶的研究进展 | 第12-16页 |
| ·漆酶的简介 | 第12页 |
| ·漆酶的结构和理化性质 | 第12页 |
| ·漆酶的来源 | 第12-13页 |
| ·漆酶的应用 | 第13-14页 |
| ·漆酶基因工程的研究进展 | 第14-16页 |
| ·乳酸菌的研究进展 | 第16-19页 |
| ·乳酸菌的简介 | 第16页 |
| ·乳酸菌的应用 | 第16-17页 |
| ·乳酸菌中质粒表达载体的研究进展 | 第17-18页 |
| ·乳酸菌基因工程的研究进展 | 第18-19页 |
| ·乳酸菌电激转化技术的研究进展 | 第19-20页 |
| ·电激转化原理 | 第19页 |
| ·影响电转化效率的因素 | 第19-20页 |
| ·研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 三种食用菌漆酶活性比较及其基因的克隆与序列分析 | 第22-34页 |
| 引言 | 第22页 |
| ·试验材料 | 第22-24页 |
| ·菌种和质粒 | 第22页 |
| ·生化试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·培养基及缓冲液的配制 | 第23-24页 |
| ·试验方法 | 第24-26页 |
| ·漆酶活性的测定 | 第24页 |
| ·漆酶基因组DNA提取 | 第24页 |
| ·PCR引物的设计 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增 | 第25页 |
| ·PCR产物回收、克隆及鉴定 | 第25页 |
| ·测序及序列分析 | 第25-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-32页 |
| ·漆酶高产菌株的筛选及漆酶活性测定 | 第26-27页 |
| ·漆酶基因的PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·核苷酸序列分析 | 第28页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第28-30页 |
| ·漆酶二级结构分析及三维结构的建模 | 第30-31页 |
| ·系统进化树的构建 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 杏鲍菇漆酶基因(Lacc1)原核表达载体的构建及乳酸菌的遗传转化 | 第34-51页 |
| 引言 | 第34页 |
| ·试验材料 | 第34-36页 |
| ·菌株和质粒 | 第34页 |
| ·工具酶和试剂 | 第34-35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第35-36页 |
| ·试验方法 | 第36-42页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·杏鲍菇菌丝的收集及丝状真菌总RNA的提取 | 第36页 |
| ·RT-PCR扩增Lacc1基因片段 | 第36-38页 |
| ·漆酶Laccl基因的回收、克隆及鉴定 | 第38页 |
| ·重组表达载体质粒pMG36e-Lacc1的构建 | 第38-39页 |
| ·乳酸菌的活化和筛选 | 第39页 |
| ·乳杆菌16S rDNA分子鉴定 | 第39-40页 |
| ·确定筛选转化子的红霉素浓度 | 第40页 |
| ·制备乳酸杆菌感受态细胞 | 第40-41页 |
| ·探究乳杆菌电激转化条件 | 第41页 |
| ·电激转化效率的计算 | 第41页 |
| ·乳杆菌重组质粒的PCR检测 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-49页 |
| ·总RNA的提取 | 第42页 |
| ·Lacc1基因cDNA片段的扩增 | 第42-45页 |
| ·重组表达载体质粒pMG36e-Lacc1的构建 | 第45-46页 |
| ·优良乳酸菌的筛选 | 第46-47页 |
| ·红霉素的最小抑制浓度的测定 | 第47页 |
| ·影响乳杆菌电激转化的因素 | 第47-48页 |
| ·乳杆菌重组质粒的PCR检测 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第64页 |