| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-23页 |
| 1 菌糠灵芝多糖 | 第13-15页 |
| ·菌糠、产量、分类、目前用途 | 第13页 |
| ·灵芝多糖提取、纯化 | 第13-14页 |
| ·灵芝多糖作为添加剂的研究进展 | 第14-15页 |
| 2 瘤胃微生物 | 第15-18页 |
| ·瘤胃微生物分类 | 第15-16页 |
| ·瘤胃微生物菌群介绍 | 第16-17页 |
| ·瘤胃微生物互作关系 | 第17-18页 |
| ·瘤胃细菌与瘤胃真菌的互作关系 | 第17-18页 |
| ·瘤胃细菌与瘤胃原虫的互作关系 | 第18页 |
| 3 瘤胃微生物体外培养法 | 第18-20页 |
| ·瘤胃微生物体外培养法简介 | 第18-19页 |
| ·瘤胃微生物体外培养法指标测定 | 第19-20页 |
| 4 瘤胃微生物定量方法 | 第20-23页 |
| ·传统定量方法 | 第20-21页 |
| ·分子定量方法 | 第21页 |
| ·实时荧光定量技术 | 第21-23页 |
| 实验一 菌草灵芝菌糠多糖提取方法研究与优化 | 第23-29页 |
| 1 材料与方法 | 第23-27页 |
| ·菌草灵芝菌糠 | 第23页 |
| ·实验试剂 | 第23页 |
| ·实验仪器 | 第23页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖提取条件优化 | 第23-25页 |
| ·热水浸提法步骤 | 第23-24页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖提取条件优化 | 第24-25页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖纯化 | 第25页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖含量测定 | 第25-27页 |
| ·测定原理 | 第26页 |
| ·试剂准备 | 第26页 |
| ·分析步骤 | 第26-27页 |
| ·结果计算 | 第27页 |
| 2 实验结果 | 第27-29页 |
| 实验二 菌草灵芝菌糠多糖体外人工瘤胃发酵特性影响 | 第29-40页 |
| 1 实验材料与方法 | 第29-34页 |
| ·体外人工瘤胃液配制 | 第29页 |
| ·培养液混合顺序和比例 | 第29页 |
| ·实验仪器 | 第29页 |
| ·实验动物及饲养管理 | 第29-30页 |
| ·实验设计与操作步骤 | 第30-31页 |
| ·实验设计 | 第30页 |
| ·体外人工瘤胃发酵装置 | 第30-31页 |
| ·操作步骤 | 第31页 |
| ·测定项目与测定方法 | 第31-34页 |
| ·气体产量(GP)测定 | 第31-32页 |
| ·pH值测定 | 第32页 |
| ·氨态氮(NH_3-N)浓度测定 | 第32-33页 |
| ·微生物蛋白(MCP)浓度测定 | 第33页 |
| ·挥发性脂肪酸(VFA)浓度测定 | 第33-34页 |
| ·数据处理 | 第34页 |
| 2 实验结果与分析 | 第34-37页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃GP的影响 | 第34页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃pH值的影响 | 第34-35页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃NH_3-N浓度的影响 | 第35页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃MCP产量的影响 | 第35-36页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃VFA浓度的影响 | 第36-37页 |
| 3 讨论 | 第37-39页 |
| ·不同菌草灵芝菌糠多糖添加量对人工瘤胃GP的影响 | 第37-38页 |
| ·不同菌草灵芝菌糠多糖添加量对人工瘤胃pH值的影响 | 第38页 |
| ·不同菌草灵芝菌糠多糖添加量对人工瘤胃NH_3-N浓度的影响 | 第38页 |
| ·不同菌草灵芝菌糠多糖添加量对人工瘤胃MCP浓度的影响 | 第38-39页 |
| ·不同菌草灵芝菌糠多糖添加量对人工瘤胃VFA浓度的影响 | 第39页 |
| 4 小结 | 第39-40页 |
| 实验三 菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃微生物区系影响 | 第40-58页 |
| 1 实验材料与方法 | 第40-48页 |
| ·实验材料与试剂配制 | 第40-41页 |
| ·实验主要材料 | 第40页 |
| ·试剂配制 | 第40-41页 |
| ·实验仪器 | 第41页 |
| ·引物设计与合成 | 第41-42页 |
| ·体外人工瘤胃液采集 | 第42页 |
| ·体外人工瘤胃微生物DNA提取步骤 | 第42-43页 |
| ·体外人工瘤胃微生物总DNA纯化 | 第43页 |
| ·体外人工瘤胃瘤胃微生物总DNA鉴定 | 第43页 |
| ·体外人工瘤胃DNA质量PCR检测 | 第43-45页 |
| ·体外人工瘤胃微生物DNA标准品制备 | 第45-47页 |
| ·体外人工瘤胃微生物目标PCR产物制备 | 第45页 |
| ·扩增产物的纯化 | 第45-46页 |
| ·产物与载体连接 | 第46页 |
| ·质粒DNA提取 | 第46页 |
| ·阳性克隆PCR产物凝胶电泳检测 | 第46-47页 |
| ·体外人工瘤胃微生物阳性克隆的测序与比对 | 第47页 |
| ·质粒浓度换算 | 第47页 |
| ·Real time PCR反应体系与扩增条件 | 第47-48页 |
| ·Real time PCR反应体系 | 第47-48页 |
| ·Real-time PCR扩增条件分三步 | 第48页 |
| ·数据处理 | 第48页 |
| 2 实验结果 | 第48-55页 |
| ·体外人工瘤胃微生物DNA提取结果 | 第48-51页 |
| ·体外人工瘤胃微生物总DNA的提取 | 第48-49页 |
| ·体外人工瘤胃微生物总DNA的纯化 | 第49页 |
| ·PCR产物电泳质量检测 | 第49-51页 |
| ·RT-PCR检测结果与分析 | 第51-55页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃总细菌浓度的影响 | 第51-52页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃真菌浓度的影响 | 第52页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃产甲烷菌浓度的影响 | 第52-53页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃产琥珀酸丝状杆菌浓度的影响 | 第53-54页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃黄色瘤胃球菌浓度的影响 | 第54页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃溶纤维丁酸弧菌浓度的影响 | 第54-55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| ·体外人工瘤胃微生物DNA提取结果讨论 | 第55页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃总细菌浓度的影响 | 第55页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃真菌浓度的影响 | 第55-56页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃产甲烷菌浓度的影响 | 第56页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃琥珀酸丝状杆菌浓度的影响 | 第56页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃黄色瘤胃球菌浓度的影响 | 第56-57页 |
| ·菌草灵芝菌糠多糖对体外人工瘤胃溶纤维丁酸弧菌浓度的影响 | 第57页 |
| 4 结论 | 第57-58页 |
| 实验四 菌草灵芝菌糠代替菌草对山羊瘤胃发酵特性的影响 | 第58-68页 |
| 1 实验材料与方法 | 第58-60页 |
| ·实验设计 | 第58-59页 |
| ·实验试剂 | 第59页 |
| ·实验设备 | 第59页 |
| ·测定项目与方法 | 第59-60页 |
| ·数据处理 | 第60页 |
| 2 实验结果与分析 | 第60-65页 |
| ·菌草灵芝菌糠代替菌草对山羊瘤胃pH值的影响 | 第60页 |
| ·菌草灵芝菌糠代替菌草对山羊瘤胃NH_3-N浓度的影响 | 第60页 |
| ·菌草灵芝菌糠代替菌草对山羊瘤胃MCP浓度的影响 | 第60-61页 |
| ·菌草灵芝菌糠对菌草饲喂山羊瘤胃VFA浓度的影响 | 第61-62页 |
| ·菌草灵芝菌糠代替菌草对山羊瘤胃总细菌浓度的影响 | 第62页 |
| ·菌草灵芝菌糠对菌草饲喂山羊瘤胃真菌浓度的影响 | 第62-63页 |
| ·菌草灵芝菌糠对菌草饲喂山羊瘤胃产甲烷菌浓度的影响 | 第63页 |
| ·菌草灵芝菌糠对菌草饲喂山羊瘤胃产琥珀酸丝状杆菌浓度的影响 | 第63-64页 |
| ·菌草灵芝菌糠对菌草饲喂山羊瘤胃黄色瘤胃球菌浓度的影响 | 第64页 |
| ·菌草灵芝菌糠对菌草饲喂山羊瘤胃溶纤维丁酸弧菌浓度的影响 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65-67页 |
| ·菌草灵芝菌糠代替菌草对山羊对瘤胃pH值影响 | 第65页 |
| ·菌草灵芝菌糠代替菌草对山羊对瘤胃NH_3-N浓度影响 | 第65页 |
| ·菌草灵芝菌糠代替菌草饲喂山羊对瘤胃MCP浓度影响 | 第65-66页 |
| ·菌草灵芝菌糠代替菌草饲喂山羊对瘤胃TVFA浓度影响 | 第66页 |
| ·菌草灵芝菌糠代替菌草饲喂山羊对瘤胃总细菌浓度影响 | 第66页 |
| ·菌草灵芝菌糠代替菌草饲喂山羊对瘤胃真菌浓度影响 | 第66页 |
| ·菌草灵芝菌糠代替菌草饲喂山羊对瘤胃产甲烷菌浓度影响 | 第66-67页 |
| ·菌草灵芝菌糠代替菌草饲喂山羊对瘤胃产琥珀酸丝状杆菌浓度影响 | 第67页 |
| ·菌草灵芝菌糠代替菌草饲喂山羊对瘤胃黄色瘤胃球菌浓度影响 | 第67页 |
| ·菌草灵芝菌糠代替菌草饲喂山羊对瘤胃溶纤维丁酸弧菌浓度影响 | 第67页 |
| 4 结论 | 第67-68页 |
| 全文结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-81页 |
| 本研究创新点 | 第81页 |
| 有待进一步研究问题 | 第81-82页 |
| 附录 | 第82-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
