| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 目录 | 第11-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-28页 |
| ·脂肪酶 | 第14-19页 |
| ·脂肪酶的定义和分类 | 第14-15页 |
| ·脂肪酶的表达和催化特性 | 第15-17页 |
| ·脂肪酶RML的工业应用 | 第17-19页 |
| ·酶的糖基化和糖基化对酶的影响 | 第19-22页 |
| ·糖基化定义 | 第19页 |
| ·糖基化分类 | 第19-20页 |
| ·糖基化对酶活和酶结构的影响 | 第20-22页 |
| ·不同宿主菌的定向进化技术比较 | 第22-23页 |
| ·RML的高密度发酵和酶制剂的制作 | 第23-27页 |
| ·毕赤酵母的启动子介绍 | 第23-24页 |
| ·毕赤酵母的发酵方法 | 第24-25页 |
| ·发酵的培养基选择 | 第25-26页 |
| ·发酵产物的纯化及浓缩 | 第26-27页 |
| ·课题研究的内容和意义 | 第27-28页 |
| 2 脂肪酶RML的克隆表达和活性测定 | 第28-42页 |
| ·材料和方法 | 第28-38页 |
| ·材料 | 第28-30页 |
| ·实验方法 | 第30-38页 |
| ·结果 | 第38-41页 |
| ·目的基因的克隆及鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组载体的构建及鉴定 | 第39页 |
| ·重组酵母的基因鉴定 | 第39-40页 |
| ·RML的表达及活性测定 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| 3 利用去糖基化技术提高脂肪酶RML的活性 | 第42-51页 |
| ·材料和方法 | 第42-45页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·结果 | 第45-49页 |
| ·RML的PNGase去糖基 | 第45-46页 |
| ·糖基化对酶活的影响 | 第46-47页 |
| ·糖基化对前导肽切除的影响 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 4 米黑根毛霉脂肪酶在大肠杆菌和毕赤酵母中的定向进化比较 | 第51-55页 |
| ·材料和方法 | 第51-53页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·结果 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 5 RML在酿酒酵母中表达 | 第55-61页 |
| ·材料和方法 | 第56-59页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-59页 |
| ·结果和讨论 | 第59-61页 |
| 6 RML在毕赤酵母中的定向进化 | 第61-67页 |
| ·材料和方法 | 第62-64页 |
| ·材料 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-64页 |
| ·结果 | 第64-65页 |
| ·高通量筛选方法的选择 | 第64页 |
| ·定向进化的结果 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 7 RML的发酵优化 | 第67-76页 |
| ·材料和方法 | 第67-72页 |
| ·材料 | 第67-68页 |
| ·方法 | 第68-72页 |
| ·结果 | 第72-75页 |
| ·高拷贝的筛选 | 第72-73页 |
| ·脂肪酶(M3)的发酵 | 第73-74页 |
| ·酶的真空干燥和喷雾干燥 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-76页 |
| 8 结论和展望 | 第76-78页 |
| ·结论 | 第76-77页 |
| ·展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 附录部分 | 第83-87页 |