| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 1 文章综述 | 第12-18页 |
| ·PRRSV的简介 | 第12-13页 |
| ·天然免疫的简介 | 第13-14页 |
| ·DDX3X的简介 | 第14页 |
| ·DDX3X的功能 | 第14-18页 |
| ·参与RNA代谢 | 第14-15页 |
| ·DDX3X控制细胞周期、凋亡,与肿瘤的发生有关 | 第15页 |
| ·DDX3X参与天然免疫信号通路,增强抗病毒物质的产生 | 第15-16页 |
| ·DDX3X是病毒调控的目标之一 | 第16-18页 |
| 2 研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-28页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·细胞、毒株、菌株 | 第19页 |
| ·引物、质粒 | 第19-20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·细胞培养基的配制 | 第20-21页 |
| ·试验方法 | 第21-28页 |
| ·外源目的基因的普通PCR扩增 | 第21页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第21页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第21-22页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第22页 |
| ·外源目的DNA片段与目的载体的连接反应 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法)及连接产物的转化 | 第22页 |
| ·质粒的小量制备 | 第22页 |
| ·质粒的大提制备 | 第22-23页 |
| ·质粒DNA的定量 | 第23页 |
| ·重组质粒(阳性质粒)的鉴定 | 第23页 |
| ·脂质体2000转染 | 第23页 |
| ·PRRSV WuH3病毒的培养与收集 | 第23页 |
| ·TCID_(50)的测定 | 第23页 |
| ·RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·逆转录PCR | 第24页 |
| ·绝对荧光定量PCR | 第24-25页 |
| ·相对定量PCR | 第25页 |
| ·DAPI核染色 | 第25-26页 |
| ·测荧光 | 第26页 |
| ·猪DDX3X在PK-15细胞中的定位 | 第26页 |
| ·猪DDX3X与TBK1/IPS-1的共定位试验 | 第26页 |
| ·PRRSV对猪DDX3X在Marc-145细胞中定位的影响 | 第26页 |
| ·siRNA的干扰效果 | 第26-27页 |
| ·猪DDX3X对IFN-β产生的影响 | 第27页 |
| ·猪DDX3X激活IFN-β启动子的试验 | 第27页 |
| ·猪DDX3X促进TBK1/IPS-1激活IFN-β启动子的试验 | 第27页 |
| ·PAM细胞接PRRSV后猪DDX3X的表达情况 | 第27页 |
| ·瞬时表达猪DDX3X观察其对PRRSV增殖的影响 | 第27页 |
| ·统计学方法 | 第27-28页 |
| 4 结果和分析 | 第28-40页 |
| ·猪DDX3X基因的克隆、序列分析以及进化树的绘制 | 第28-31页 |
| ·猪DDX3X基因的RT-PCR扩增 | 第28页 |
| ·猪DDX3X的序列分析 | 第28-31页 |
| ·猪DDX3X的亚细胞定位 | 第31页 |
| ·猪DDX3X在IFN-β诱导中的作用 | 第31-38页 |
| ·猪DDX3X参与IFN-β的诱导 | 第31-33页 |
| ·猪DDX3X激活IFN-β启动子 | 第33-34页 |
| ·猪DDX3X以剂量依赖的形式促进TBK1激活IFN-β启动子 | 第34-36页 |
| ·猪DDX3X以剂量依赖的形式促进IPS-1激活IFN-β启动子 | 第36-38页 |
| ·猪DDX3X与PRRSV的相互作用 | 第38-40页 |
| ·PRRSV不改变猪DDX3X在Marc-145细胞中的定位 | 第38页 |
| ·猪DDX3X抑制PRRSV的增殖 | 第38-39页 |
| ·PRRSV感染PAM细胞上调猪DDX3X的表达 | 第39-40页 |
| 5 讨论与结论 | 第40-43页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| ·结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
