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副猪嗜血杆菌分子流行病学及其OMP-P2基因抗原性与检测技术研究

摘要第1-11页
ABSTRACT第11-15页
第一章 副猪嗜血杆菌研究进展第15-47页
 1 副猪嗜血杆菌的理化特性第15-18页
 2 毒力及毒力因子第18-25页
   ·血清型与毒力第18-19页
   ·常见潜在毒力因子的研究第19-23页
   ·致病机理第23页
   ·病理变化第23-25页
 3. 流行病学第25-31页
   ·临床流行病学第25-27页
   ·血清流行病学研究第27-28页
   ·分子流行病学研究第28-31页
 4 诊断与防制第31-39页
   ·诊断第31-35页
   ·防制第35-39页
 研究目的及意义第39-40页
 参考文献第40-47页
第二章 副猪嗜血杆菌的分离鉴定与部分生物学特性比较第47-73页
 摘要第47-48页
 1 材料与方法第48-53页
   ·材料第48-49页
   ·方法第49-53页
 2 结果第53-64页
   ·固体培养基选择结果第53-54页
   ·液体培养基选择结果第54-55页
   ·生化鉴定结果第55页
   ·16S rRNA PCR鉴定结果第55-56页
   ·分离菌的背景情况统计第56-57页
   ·细菌分离培养及形态观察结果第57-60页
   ·药敏试验结果第60-61页
   ·HB070214半数致死量(LD50)测定第61-62页
   ·仔猪致病性试验结果第62-63页
   ·高免血清的制备及琼扩试验结果第63-64页
 3. 讨论第64-69页
   ·副猪嗜血杆菌的培养条件第64-65页
   ·HPS的形态特征观察第65-66页
   ·HPS的鉴定第66页
   ·HPS的耐药性第66-67页
   ·HPS对动物的致病力第67-68页
   ·各血清型间的交叉保护第68-69页
 参考文献第69-72页
 Abstract第72-73页
第三章 副猪嗜血杆菌分离株ERIC-PCR指纹图谱分析第73-87页
 摘要第73-74页
 1 材料与方法第74-75页
   ·材料第74-75页
   ·方法第75页
 2 结果第75-80页
   ·副猪嗜血杆菌野生分离株的相关背景第75-76页
   ·ERIC-PCR方法对副猪嗜血杆菌参考株和野生分离株的分型结果第76-80页
 3 讨论第80-84页
 参考文献第84-85页
 Abstract第85-87页
第四章 副猪嗜血杆菌OMP P2基因的序列测定及分型第87-103页
 摘要第87-88页
 1 材料和方法第88-90页
   ·菌株和质粒第88页
   ·酶及主要试剂和设备第88页
   ·不同血清型菌株ERIC-PCR第88-89页
   ·ERIC-PCR特异条带的克隆与测序第89-90页
   ·原核表达载体的构建及鉴定第90页
   ·OMP P2基因在BL21中的诱导表达第90页
   ·SDS-PAGE分析第90页
   ·Western-blot分析第90页
 2 结果与分析第90-96页
   ·不同血清型菌株和7株分离株ERIC-PCR结果第90-91页
   ·ERIC-PCR特异条带的克隆与测序第91-92页
   ·Omp P2基因的扩增结果第92-93页
   ·OMP P2基因的克隆、鉴定与序列测定第93-96页
   ·原核表达重组质粒的构建第96页
   ·OMP P2基因的原核表达和Western blot分析第96页
 3 讨论第96-100页
 参考文献第100-102页
 Abstract第102-103页
第五章 副猪嗜血杆菌重组OMP P2蛋白的高效表达与抗原性研究第103-119页
 摘要第103-104页
 1 材料与方法第104-107页
   ·菌株与抗体第104页
   ·载体与菌株及试剂第104页
   ·引物设计第104-105页
   ·P2-PCR扩增第105页
   ·原核表达载体的构建第105页
   ·重组融合蛋白在大肠杆菌中的表达第105页
   ·重组融合蛋白的纯化及免疫学活性检测第105-106页
   ·间接ELISA抗原性试验第106页
   ·小鼠免疫试验第106-107页
 2 结果第107-112页
   ·HPS P2基因的克隆及序列分析第107-108页
   ·重组表达质粒的构建第108-109页
   ·重组融合蛋白的表达与纯化第109-110页
   ·间接ELISA抗原性第110-111页
   ·小鼠免疫试验第111-112页
 3 讨论第112-114页
 参考文献第114-117页
 Abstract第117-119页
第六章 副猪嗜血杆菌OMP P2基因PCR检测方法的建立与应用第119-131页
 摘要第119-120页
 1 材料与方法第120-122页
   ·试剂第120页
   ·菌种第120页
   ·PCR引物第120页
   ·HPS的复制第120页
   ·HPS的分离培养第120-121页
   ·细菌DNA提取第121页
   ·PCR反应第121页
   ·PCR灵敏性试验第121页
   ·PCR产物克隆与DNA序列分析第121-122页
   ·PCR方法的应用第122页
 2 结果第122-125页
   ·PCR条件的确立第122页
   ·特异性试验第122-123页
   ·灵敏性试验第123页
   ·检测样品的选择第123-124页
   ·临床样品的检测与应用第124-125页
 3 讨论第125-127页
 参考文献第127-129页
 Abstract第129-131页
全文总结第131-132页
致谢第132-133页
发表的论文及出版的著作第133页

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