| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第1章 前言 | 第11-19页 |
| ·谷胱甘肽的基本介绍 | 第11页 |
| ·GSH合成的生理过程及其生理功能 | 第11-12页 |
| ·GSH的应用价值 | 第12-14页 |
| ·医药方面的应用 | 第12-13页 |
| ·食品方面的应用 | 第13-14页 |
| ·GSH的生产方法 | 第14-16页 |
| ·新型双功能GSH合成酶的研究 | 第16-17页 |
| ·本课题研究背景、意义和主要内容 | 第17-19页 |
| ·研究背景及意义 | 第17页 |
| ·研究内容 | 第17-19页 |
| 第2章 新型双功能谷胱甘肽合成酶的克隆与序列分析 | 第19-28页 |
| ·前言 | 第19页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·菌株与质粒 | 第19页 |
| ·仪器与试剂 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-21页 |
| ·不同来源的gshFs的克隆 | 第20页 |
| ·不同来源的GshFs序列比对及同源关系分析 | 第20-21页 |
| ·结果与讨论 | 第21-27页 |
| ·来源于嗜热链球菌、琥珀酸放线杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌的新型双功能谷胱甘肽合成酶的基因克隆 | 第21页 |
| ·不同来源的GshFs蛋白结构的比对分析 | 第21-27页 |
| ·本章小结 | 第27-28页 |
| 第3章 表达新型双功能谷胱甘肽合成酶的重组大肠杆菌的构建和鉴定 | 第28-37页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第28页 |
| ·化学试剂与仪器 | 第28-29页 |
| ·培养基、反应液和缓冲液 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-31页 |
| ·构建表达新型双功能GSH合成酶的重组E.coli | 第29页 |
| ·重组E.coli的质粒稳定性分析 | 第29-30页 |
| ·重组E.coli培养和诱导 | 第30页 |
| ·蛋白表达检测 | 第30页 |
| ·蛋白活性鉴定 | 第30页 |
| ·GSH分析 | 第30页 |
| ·重组菌表达的摇瓶发酵条件优化 | 第30-31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-36页 |
| ·表达新型双功能GSH合成酶重组E.coli的构建 | 第31-32页 |
| ·重组E.coli质粒稳定性分析 | 第32页 |
| ·外源双功能谷胱甘肽合成酶的表达 | 第32-34页 |
| ·重组菌摇瓶发酵的优化 | 第34-35页 |
| ·重组酶的活性 | 第35-36页 |
| ·本章小结 | 第36-37页 |
| 第4章 重组GshFs的酶学特性 | 第37-44页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·化学试剂与仪器 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·缓冲液 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-39页 |
| ·蛋白纯化 | 第38页 |
| ·蛋白活性形式检测 | 第38页 |
| ·考马斯亮蓝法检测酶蛋白含量 | 第38页 |
| ·GshF酶动力学分析 | 第38-39页 |
| ·温度及pH对GshF酶活的影响 | 第39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-42页 |
| ·GshFs的纯化 | 第39-40页 |
| ·GshF酶动力学特性 | 第40-41页 |
| ·温度和pH对GshF的酶学性质的影响 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42-44页 |
| 第5章 重组E.coli生物催化合成GSH | 第44-52页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·菌株 | 第44页 |
| ·化学试剂与仪器 | 第44-45页 |
| ·培养基与反应液 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| ·全细胞催化生产GSH的潜力的研究 | 第45页 |
| ·主要底物浓度对细胞催化合成的影响 | 第45页 |
| ·葡萄糖为能源的全细胞催化合成GSH | 第45页 |
| ·葡萄糖的检测 | 第45-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-51页 |
| ·限制性底物浓度条件下重组菌催化生产GSH | 第46页 |
| ·高底物浓度条件下全细胞(重组菌)催化反应生产GSH | 第46-47页 |
| ·不同初始浓度的ATP和Cys对重组细胞催化能力的影响 | 第47-49页 |
| ·葡萄糖为能源的全细胞催化反应生产GSH | 第49-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 第6章 重组巴斯德毕赤酵母表达新型GshF的构建与鉴定 | 第52-58页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·菌株和质粒 | 第52页 |
| ·化学试剂 | 第52-53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-54页 |
| ·表达载体构建 | 第53-54页 |
| ·重组毕赤酵母菌的转化、筛选和鉴定 | 第54页 |
| ·双功能谷胱甘肽合成酶的表达 | 第54页 |
| ·外源蛋白定量 | 第54页 |
| ·摇瓶发酵生产GSH | 第54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-57页 |
| ·表达载体pGAPZA-gshFst的构建与鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组毕赤酵母的转化与鉴定 | 第55页 |
| ·重组菌摇瓶发酵生产GSH | 第55-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第7章 结论与展望 | 第58-60页 |
| ·论文总结 | 第58-59页 |
| ·课题展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 附录 | 第67-72页 |
| 科研成果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
