| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 符号说明 | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-27页 |
| ·生物冶金概况 | 第13-14页 |
| ·浸矿微生物简介 | 第14-15页 |
| ·嗜酸性氧化亚铁硫杆菌铁氧化机制研究进展 | 第15-16页 |
| ·嗜酸性氧化亚铁硫杆菌硫代谢机制研究进展 | 第16-23页 |
| ·硫单质(S~0)的代谢 | 第19页 |
| ·亚硫酸盐(SO_3~(2-))的代谢 | 第19-20页 |
| ·硫化氢(H_2S)的代谢 | 第20-22页 |
| ·硫代硫酸盐(S_2O_3~(2-))的代谢 | 第22页 |
| ·连四硫酸盐(S_4O_6~(2-))的代谢 | 第22-23页 |
| ·嗜酸性硫杆菌属细菌分子生物学研究进展 | 第23-25页 |
| ·本文研究目的和主要研究内容 | 第25-27页 |
| 第二章 嗜酸性氧化亚铁硫杆菌连四硫酸盐水解酶基因(tetH)高效表达工程菌的构建 | 第27-43页 |
| 引言 | 第27页 |
| ·材料和方法 | 第27-37页 |
| ·培养基配制 | 第28-29页 |
| ·抗生素配制使用浓度 | 第29-30页 |
| ·连四硫酸盐水解酶基因高效表达载体的构建方法 | 第30-34页 |
| ·连四硫酸盐水解酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第34-36页 |
| ·嗜酸性氧化亚铁硫杆菌高效代谢连四硫酸盐工程菌构建 | 第36-37页 |
| ·结果和讨论 | 第37-42页 |
| ·重组质粒pUC19-tetH的构建 | 第37页 |
| ·连四硫酸盐水解酶基因高效表达载体的构建 | 第37-40页 |
| ·连四硫酸盐水解酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第40-41页 |
| ·接合转移 | 第41页 |
| ·接合转移子鉴定 | 第41-42页 |
| 本章小结 | 第42-43页 |
| 第三章 嗜酸性氧化亚铁硫杆菌tetH基因敲除突变株构建 | 第43-61页 |
| 引言 | 第43页 |
| ·材料和方法 | 第43-49页 |
| ·培养基的配制和培养方法 | 第45页 |
| ·大肠杆菌中分子生物学操作技术 | 第45页 |
| ·大肠杆菌与嗜酸性氧化亚铁硫杆菌的接合转移 | 第45页 |
| ·At.ferrooxidans ATCC 23270 tetH基因单交换子筛选 | 第45页 |
| ·Ecoli SM10(pMSD1-I-SceI)与At.ferrooxidans ATCC 23270 tetH基因单交换子的接合转移 | 第45-46页 |
| ·At.ferrooxidans ATCC 23270 tetH基因双交换子(tetH基因敲除突变株)筛选 | 第46页 |
| ·At.ferrooxidans ATCC 23270 tetH基因敲除突变株的PCR验证 | 第46页 |
| ·At.ferrooxidans ATCC 23270 tetH基因敲除突变株的Southern blot验证 | 第46-49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-59页 |
| ·At.ferrooxidans ATCC 23270 tetH基因敲除自杀质粒构建 | 第51-52页 |
| ·At.ferrooxidans ATCC 23270 tetH基因单交换子筛选 | 第52-54页 |
| ·At.ferrooxidans ATCC 23270 tetH基因敲除突变株筛选 | 第54-56页 |
| ·At.ferrooxidans ATCC 23270 tetH基因敲除突变株的PCR验证 | 第56-57页 |
| ·At.ferrooxidans ATCC 23270 tetH基因敲除突变株的Southernblot验证 | 第57-59页 |
| 本章小结 | 第59-61页 |
| 第四章 嗜酸性氧化亚铁硫杆菌tetH基因高效表达工程菌及tetH基因敲除突变株性质研究 | 第61-85页 |
| 引言 | 第61页 |
| ·材料和方法 | 第61-71页 |
| ·培养基配制以及培养方法 | 第61-62页 |
| ·嗜酸性氧化亚铁硫杆菌野生型与tetH基因高效表达工程菌及tetH基因敲除突变株的生长测定 | 第62-63页 |
| ·9K-K_2S_4O_6液体培养基中连四硫酸盐(S_4O_6~(2-))利用情况测定 | 第63-64页 |
| ·连四硫酸盐水解酶(TetH)酶活测定方法 | 第64页 |
| ·总RNA的提取 | 第64-68页 |
| ·反转录 | 第68-69页 |
| ·qRT-PCR | 第69-71页 |
| ·结果与讨论 | 第71-83页 |
| ·嗜酸性氧化亚铁硫杆菌野生型与tetH基因高效表达工程菌及tetH基因敲除突变株的生长测定 | 第71-75页 |
| ·9K-K_2S_4O_6液体培养基中连四硫酸盐(S_4O_6~(2-))利用情况测定 | 第75-76页 |
| ·连四硫酸盐水解酶(TetH)酶活测定 | 第76-77页 |
| ·qRT-PCR | 第77-83页 |
| 本章小结 | 第83-85页 |
| 总结与展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第95页 |
