中文摘要 | 第1-4页 |
ABSTRACT | 第4-7页 |
前言 | 第7-8页 |
第一章 文献综述 | 第8-21页 |
·G 蛋白与细胞信号转导 | 第8-10页 |
·RAS 基因及其蛋白产物 | 第10-11页 |
·cAMP 信号通路的组成及作用 | 第11-12页 |
·酿酒酵母cAMP 信号转导通路 | 第12-17页 |
·G 蛋白偶联的受体体系(Gpr1-Gpa2) | 第13-14页 |
·Ras-cAMP 信号通路组成 | 第14-15页 |
·cAMP 途径的主要靶标--cAMP 依赖的蛋白激酶PKA | 第15-16页 |
·PKA 调节亚基Bcy1 的细胞定位 | 第16-17页 |
·信号转导通路的区位划分 | 第16页 |
·Zds1 与Bcy1 定位之间的相互作用关系研究进展 | 第16-17页 |
·FGM 信号通路及其主要作用元件 | 第17-19页 |
·Sch9 和PKA 的相互作用关系 | 第19页 |
·cAMP-PKA 途径与胁迫响应之间的关系 | 第19-20页 |
·本论文的研究思路 | 第20-21页 |
第二章 材料与方法 | 第21-35页 |
·实验材料 | 第21-27页 |
·质粒、菌株与引物 | 第21-23页 |
·质粒 | 第21页 |
·菌株 | 第21-22页 |
·引物 | 第22-23页 |
·主要实验仪器 | 第23-24页 |
·主要试剂 | 第24-25页 |
·培养基 | 第25-26页 |
·主要溶液 | 第26-27页 |
·实验方法 | 第27-35页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第27-28页 |
·CaCl_2 法 | 第27页 |
·电转化法 | 第27-28页 |
·小规模提取大肠杆菌质粒法(CTAB 法) | 第28页 |
·酵母染色体的快速分离 | 第28-29页 |
·PCR 扩增反应 | 第29-30页 |
·DNA 的限制酶消化 | 第30页 |
·DNA 的连接反应 | 第30-31页 |
·DNA 的琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
·从琼脂糖中回收DNA | 第31页 |
·酵母细胞的转化方法 | 第31-32页 |
·酵母中质粒的回收 | 第32页 |
·酵母交配型的验证 | 第32-33页 |
·不同交配型酵母细胞之间的杂交 | 第33页 |
·产孢及四分体孢子拆分 | 第33页 |
·Dilution 实验方法 | 第33-34页 |
·热击实验方法 | 第34-35页 |
·水浴热击 | 第34-35页 |
第三章 结果与讨论 | 第35-53页 |
·Zds1/Sch9 对PKA 活性表型的影响 | 第35-39页 |
·SCH9 基因的缺失 | 第35页 |
·ZDS1 基因的缺失 | 第35-36页 |
·SCH9 和ZDS1 基因的双缺失 | 第36-37页 |
·质粒YEplac195-ZDS1 的构建 | 第37页 |
·Zds1/Sch9 对PKA 活性表型的协同作用 | 第37-39页 |
·Zds1/Sch9 对PKA 调节亚基Bcy1 定位的调控 | 第39-52页 |
·质粒YEplac181-SCH9 的构建 | 第39-41页 |
·质粒YCplac22-GFP-BCY1 的构建 | 第41-42页 |
·质粒YEplac181-ZDS1-GFP 的构建 | 第42-43页 |
·缺失SCH9 对Bcy1 定位的影响 | 第43-44页 |
·缺失ZDS1 对Bcy1 定位的影响 | 第44-46页 |
·过量表达SCH9 以及过量表达ZDS1 对Bcy1 定位的影响 | 第46-48页 |
·SCH9 和ZDS1 双缺失对Bcy1 定位的影响 | 第48-50页 |
·Zds1 在细胞内定位情况的初探 | 第50-52页 |
·Bcy1 的定位与PKA 活性之间的关系推测 | 第52-53页 |
第四章 总结与展望 | 第53-55页 |
·主要工作总结 | 第53-54页 |
·相关工作展望 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-60页 |
致谢 | 第60页 |