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酿酒酵母Zds1/Sch9在Ras-cAMP信号通路中的功能研究

中文摘要第1-4页
ABSTRACT第4-7页
前言第7-8页
第一章 文献综述第8-21页
   ·G 蛋白与细胞信号转导第8-10页
   ·RAS 基因及其蛋白产物第10-11页
   ·cAMP 信号通路的组成及作用第11-12页
   ·酿酒酵母cAMP 信号转导通路第12-17页
     ·G 蛋白偶联的受体体系(Gpr1-Gpa2)第13-14页
     ·Ras-cAMP 信号通路组成第14-15页
     ·cAMP 途径的主要靶标--cAMP 依赖的蛋白激酶PKA第15-16页
     ·PKA 调节亚基Bcy1 的细胞定位第16-17页
       ·信号转导通路的区位划分第16页
       ·Zds1 与Bcy1 定位之间的相互作用关系研究进展第16-17页
   ·FGM 信号通路及其主要作用元件第17-19页
     ·Sch9 和PKA 的相互作用关系第19页
   ·cAMP-PKA 途径与胁迫响应之间的关系第19-20页
   ·本论文的研究思路第20-21页
第二章 材料与方法第21-35页
   ·实验材料第21-27页
     ·质粒、菌株与引物第21-23页
       ·质粒第21页
       ·菌株第21-22页
       ·引物第22-23页
     ·主要实验仪器第23-24页
     ·主要试剂第24-25页
     ·培养基第25-26页
     ·主要溶液第26-27页
   ·实验方法第27-35页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化第27-28页
       ·CaCl_2 法第27页
       ·电转化法第27-28页
     ·小规模提取大肠杆菌质粒法(CTAB 法)第28页
     ·酵母染色体的快速分离第28-29页
     ·PCR 扩增反应第29-30页
     ·DNA 的限制酶消化第30页
     ·DNA 的连接反应第30-31页
     ·DNA 的琼脂糖凝胶电泳第31页
     ·从琼脂糖中回收DNA第31页
     ·酵母细胞的转化方法第31-32页
     ·酵母中质粒的回收第32页
     ·酵母交配型的验证第32-33页
     ·不同交配型酵母细胞之间的杂交第33页
     ·产孢及四分体孢子拆分第33页
     ·Dilution 实验方法第33-34页
     ·热击实验方法第34-35页
       ·水浴热击第34-35页
第三章 结果与讨论第35-53页
   ·Zds1/Sch9 对PKA 活性表型的影响第35-39页
     ·SCH9 基因的缺失第35页
     ·ZDS1 基因的缺失第35-36页
     ·SCH9 和ZDS1 基因的双缺失第36-37页
     ·质粒YEplac195-ZDS1 的构建第37页
     ·Zds1/Sch9 对PKA 活性表型的协同作用第37-39页
   ·Zds1/Sch9 对PKA 调节亚基Bcy1 定位的调控第39-52页
     ·质粒YEplac181-SCH9 的构建第39-41页
     ·质粒YCplac22-GFP-BCY1 的构建第41-42页
     ·质粒YEplac181-ZDS1-GFP 的构建第42-43页
     ·缺失SCH9 对Bcy1 定位的影响第43-44页
     ·缺失ZDS1 对Bcy1 定位的影响第44-46页
     ·过量表达SCH9 以及过量表达ZDS1 对Bcy1 定位的影响第46-48页
     ·SCH9 和ZDS1 双缺失对Bcy1 定位的影响第48-50页
     ·Zds1 在细胞内定位情况的初探第50-52页
   ·Bcy1 的定位与PKA 活性之间的关系推测第52-53页
第四章 总结与展望第53-55页
   ·主要工作总结第53-54页
   ·相关工作展望第54-55页
参考文献第55-60页
致谢第60页

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