| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| ·生物固氮的概述 | 第13-19页 |
| ·生物固氮的种类 | 第13-14页 |
| ·斯氏假单胞菌A1501的研究历史及现状 | 第14-15页 |
| ·固氮酶基因的组成 | 第15-16页 |
| ·固氮酶结构基因(nifHDK)操纵子的表达 | 第16页 |
| ·固氮酶基因的调控因子NifL和NifA | 第16-18页 |
| ·固氮酶翻译后活性水平的调节 | 第18-19页 |
| ·氮同化代谢 | 第19-24页 |
| ·氮同化代谢途径第一大类 | 第20-21页 |
| ·氨同化 | 第21-23页 |
| ·P_Ⅱ蛋白在氮代谢调控中的作用 | 第23-24页 |
| ·泌铵菌的类型及应用前景 | 第24-26页 |
| ·化学诱变产生泌铵菌 | 第24-25页 |
| ·遗传改造泌铵工程菌 | 第25页 |
| ·泌铵菌的应用前景 | 第25-26页 |
| ·立题依据 | 第26页 |
| ·技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 泌铵工程菌1561/pVA3的构建及鉴定 | 第27-43页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·酶、试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·抗生素 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-36页 |
| ·A1501菌株基因组DNA的提取 | 第29页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第29-30页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第30-31页 |
| ·酶切及连接反应 | 第31页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收 | 第31页 |
| ·高效率转化感受态细胞的制备、转化 | 第31-32页 |
| ·碱裂解法小量提取细菌质粒DNA | 第32-33页 |
| ·菌种的保存 | 第33页 |
| ·三亲接合实验 | 第33页 |
| ·菌株固氮活性测定 | 第33-34页 |
| ·总蛋白的测定:BCA法蛋白含量标准曲线的测定 | 第34-35页 |
| ·NH_4~+浓度的测定 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-41页 |
| ·nifA组成型质粒pVA3的构建 | 第36-37页 |
| ·工程菌A1501/pVA3和1561/pVA3的构建及验证 | 第37-38页 |
| ·1561铵转运载体蛋白的鉴定 | 第38-39页 |
| ·泌铵工程菌1561/pVA3的鉴定 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 泌铵工程菌1561/pVA3与野生型对水稻的促生作用 | 第43-48页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·菌株 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-45页 |
| ·水稻根表定植试验 | 第44页 |
| ·根表竞争实验 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-47页 |
| ·泌铵工程菌1561/pVA3对水稻的接种效应 | 第45-46页 |
| ·突变株根表定殖的平板记数 | 第46页 |
| ·泌铵工程菌1561/pVA3与野生型A1501在根表竞争比较 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 泌铵工程菌1561/pVA3泌铵原因分析 | 第48-64页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·菌株和质粒 | 第48页 |
| ·酶,试剂,试剂盒及主要仪器 | 第48页 |
| ·培养基与抗生素 | 第48页 |
| ·PCR引物 | 第48-49页 |
| ·硝酸盐和亚硝酸检测试剂 | 第49页 |
| ·实时荧光定量PCR(QRT-PCR)原理 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-55页 |
| ·反转录样品的处理 | 第50-51页 |
| ·细菌总RNA的提取 | 第51页 |
| ·第一链cDNA的反转录合成 | 第51-52页 |
| ·实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的实验过程 | 第52-53页 |
| ·数据分析 | 第53页 |
| ·GS酶的测定方法(全细胞测定法,γ-GT assay) | 第53-54页 |
| ·硝酸盐及亚硝酸盐的检测 | 第54页 |
| ·菌株生长曲线的测定 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-63页 |
| ·GS酶活的测定 | 第55-56页 |
| ·不同氮源对泌铵工程菌生长的影响 | 第56-57页 |
| ·硝化与反硝化作用对泌铵工程菌的泌铵的影响 | 第57-58页 |
| ·铵冲击对泌铵工程菌固氮酶活的影响 | 第58-60页 |
| ·RNA的提取 | 第60页 |
| ·实时定量PCR验证固氮调控基因在泌铵工程菌中的表达情况 | 第60-63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| 第五章 结论 | 第64-65页 |
| 附录1 | 第65-67页 |
| 附录2 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简历 | 第78页 |
