| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-5页 |
| 中文文摘 | 第5-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-28页 |
| ·课题背景 | 第10-11页 |
| ·藻红蛋白的研究背景与现状 | 第11-22页 |
| ·藻红蛋白的分类 | 第11页 |
| ·藻红蛋白结构 | 第11-12页 |
| ·藻红蛋白的脱辅基蛋白基因结构 | 第12-13页 |
| ·藻红蛋白脱辅基蛋白基因序列特征 | 第13-14页 |
| ·藻胆蛋白基因工程研究进展 | 第14-16页 |
| ·藻红蛋白应用 | 第16-22页 |
| ·光动力治疗 | 第16-19页 |
| ·荧光探针方面应用 | 第19-21页 |
| ·抗氧化和抗炎症功能 | 第21-22页 |
| ·藻类核酸抽提研究进展 | 第22-24页 |
| ·材料的选取 | 第22-23页 |
| ·藻类核酸抽提的难点 | 第23-24页 |
| ·酚类物质 | 第23页 |
| ·多糖 | 第23-24页 |
| ·蛋白质 | 第24页 |
| ·核酸抽提时应注意事项 | 第24页 |
| ·研究目的与意义 | 第24-26页 |
| ·技术路线 | 第26-28页 |
| 第2章 紫球藻基因组DNA五种提取方法的比较及藻红蛋白部分基因的扩增 | 第28-38页 |
| ·前言 | 第28页 |
| ·材料与方法 | 第28-32页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·藻种 | 第28页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第28-29页 |
| ·试剂与质粒 | 第29页 |
| ·工具酶 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-32页 |
| ·藻的培养 | 第29页 |
| ·藻体的收集及处理 | 第29页 |
| ·紫球藻基因组DNA提取方法 | 第29-30页 |
| ·检测 | 第30-31页 |
| ·DNA样品的限制性内切酶酶切分析 | 第31页 |
| ·藻红蛋白α、β亚基及间隔序列PCR扩增分析 | 第31页 |
| ·目的基因的连接 | 第31页 |
| ·感受态Ecoli.JM 109制备方法 | 第31页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第31-32页 |
| ·阳性克隆子筛选 | 第32页 |
| ·测序 | 第32页 |
| ·序列分析 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-36页 |
| ·DNA纯度与产量 | 第32-33页 |
| ·电泳分析 | 第33页 |
| ·限制性内切酶酶切结果比较 | 第33-34页 |
| ·藻红蛋白α、β亚基及间隔序列克隆 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆子的筛选与验证 | 第35页 |
| ·紫球藻藻红蛋白基因序列分析 | 第35-36页 |
| ·小结与讨论 | 第36-38页 |
| 第3章 紫球藻藻红蛋白β亚基基因组DNA及cDNA克隆 | 第38-52页 |
| ·前言 | 第38页 |
| ·材料与方法 | 第38-42页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·藻种 | 第38页 |
| ·载体及工具酶 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-42页 |
| ·紫球藻总RNA提取 | 第38-39页 |
| ·RNA完整性和均一性检测 | 第39页 |
| ·反转录 | 第39页 |
| ·藻红蛋白β亚基DNA序列克隆策略 | 第39-40页 |
| ·紫球藻藻红蛋白β亚基、间隔序列及α亚基部分cDNA序列的PCR扩增 | 第40页 |
| ·带有不同酶切位点的紫球藻β亚基cDNA的获得 | 第40-41页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第41页 |
| ·连接与转化 | 第41页 |
| ·测序 | 第41页 |
| ·紫球藻藻红蛋白β亚基基因组结构的研究 | 第41-42页 |
| ·紫球藻藻红蛋白β亚基的系统进化分析 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-51页 |
| ·总RNA的提取和检测 | 第42-43页 |
| ·不同酶切位点紫球藻藻红蛋白β亚基cDNA的克隆 | 第43页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第43-45页 |
| ·阳性克隆子菌落PCR验证 | 第43-44页 |
| ·不同酶切位点紫球藻藻红蛋白β亚基cDNA重组子的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·紫球藻藻红蛋白β亚基、间隔序列及α亚基部分cDNA序列测序结果 | 第45-47页 |
| ·紫球藻藻红蛋白β亚基、间隔序列及α亚基部分序列DNA与cDNA比对分析 | 第47页 |
| ·藻红蛋白β亚基结构研究 | 第47-50页 |
| ·理化表征 | 第47-48页 |
| ·疏水性分析 | 第48页 |
| ·二级结构预测 | 第48-49页 |
| ·三级结构的预测 | 第49-50页 |
| ·紫球藻藻红蛋白β亚基系统进化分析 | 第50-51页 |
| ·小结与讨论 | 第51-52页 |
| 第4章 紫球藻藻红蛋白β亚基基因在毕赤酵母中的表达 | 第52-64页 |
| ·前言 | 第52页 |
| ·材料与方法 | 第52-57页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·载体与宿主菌 | 第52页 |
| ·工具酶与试剂 | 第52页 |
| ·仪器 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-57页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第52-55页 |
| ·pPIC3.5K-PEβ及pPIC9K-PEβ重组质粒的线性化 | 第55页 |
| ·制备感受态甲醇毕赤酵母GS115 | 第55-56页 |
| ·重组质粒电击转化至感受态毕赤酵母 | 第56页 |
| ·阳性转化子的抗性筛选 | 第56页 |
| ·酵母重组细胞的诱导表达 | 第56页 |
| ·样品制备 | 第56-57页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-61页 |
| ·pMD19-T simple-3.5PEβ重组质粒、pPIC3.5K质粒的酶切 | 第57页 |
| ·pMD19-T simple-9PEβ重组质粒、pPIC 9K质粒的酶切 | 第57-58页 |
| ·重组大肠杆菌阳性克隆子菌落PCR验证 | 第58-59页 |
| ·pPIC3.5K-PEβ及pPIC9K-PEβ重组质粒序列测定 | 第59页 |
| ·重组质粒电转化至感受态毕赤酵母细胞 | 第59-60页 |
| ·重组酵母菌阳性克隆子基因组PCR验证 | 第60页 |
| ·SDS-PAGE检测重组蛋白的表达 | 第60-61页 |
| ·小结与讨论 | 第61-64页 |
| 结论 | 第64-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 个人简历 | 第80-82页 |
