| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-24页 |
| 1 香菇概述 | 第14-16页 |
| ·香菇分类及分布 | 第14页 |
| ·香菇的生活史 | 第14-15页 |
| ·香菇营养及药用价值 | 第15-16页 |
| 2 香菇的转化现状 | 第16-17页 |
| 3 本研究所用的转化方法、启动子及筛选标记 | 第17-19页 |
| ·本研究所用的转化方法——农杆菌介导转化法 | 第17-18页 |
| ·本研究所用的启动子及筛选标记 | 第18-19页 |
| ·GPD 基因启动子 | 第18页 |
| ·潮霉素抗性标记 | 第18-19页 |
| 4 胰岛素的研究进展 | 第19-23页 |
| ·胰岛素的分子结构 | 第19-21页 |
| ·胰岛素的作用 | 第21-22页 |
| ·胰岛素与糖尿病 | 第22页 |
| ·胰岛素的研究进展 | 第22-23页 |
| ·胰岛素的市场前景 | 第23页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 BCA 基因香菇表达载体的构建 | 第24-37页 |
| 1 试验材料 | 第24-25页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第24-25页 |
| ·常用溶液 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第25页 |
| 2 试验方法 | 第25-31页 |
| ·重组质粒1300-BCA 的构建 | 第25-29页 |
| ·质粒pCB-BCA 和1300-pEGFP 的提取 | 第25页 |
| ·BCA 基因的扩增 | 第25-26页 |
| ·BCA 基因的回收 | 第26页 |
| ·酶切反应 | 第26页 |
| ·DNA 片段的回收与纯化 | 第26-27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第27页 |
| ·细菌的转化 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的提取 | 第28页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pBHg-BCA 的构建 | 第29-31页 |
| ·质粒pBHg 和1300-BCA 的提取 | 第29页 |
| ·BCA 基因表达框的扩增 | 第29页 |
| ·BCA 基因表达框的回收 | 第29页 |
| ·酶切反应 | 第29-30页 |
| ·DNA 片段的回收与纯化 | 第30页 |
| ·连接反应 | 第30页 |
| ·细菌的转化 | 第30页 |
| ·重组质粒的提取 | 第30页 |
| ·重组质粒的验证 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-36页 |
| ·重组质粒1300-BCA 的构建 | 第31-33页 |
| ·技术路线 | 第31-32页 |
| ·双酶切验证 | 第32页 |
| ·PCR 验证 | 第32-33页 |
| ·测序验证 | 第33页 |
| ·重组质粒pBHg-BCA 的构建 | 第33-36页 |
| ·技术路线 | 第33-34页 |
| ·双酶切验证 | 第34-35页 |
| ·PCR 验证 | 第35-36页 |
| ·测序验证 | 第36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 香菇农杆菌转化体系的优化 | 第37-51页 |
| 1 试验材料 | 第37-39页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第37页 |
| ·常用溶液的配制 | 第37-38页 |
| ·基本培养基、诱导培养基、共培养基所用母液的配制 | 第37-38页 |
| ·电泳所需溶液 | 第38页 |
| ·CTAB 法提取基因组DNA 所用溶液 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38-39页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第39页 |
| 2 试验方法 | 第39-43页 |
| ·香菇潮霉素抗性试验 | 第39页 |
| ·头孢噻肟钠对香菇菌丝的毒性试验 | 第39页 |
| ·质粒转化农杆菌 | 第39-41页 |
| ·转化步骤 | 第39-40页 |
| ·阳性转化子的验证 | 第40-41页 |
| ·香菇农杆菌转化体系的探索 | 第41-42页 |
| ·不同农杆菌菌株对转化率的影响 | 第41页 |
| ·不同香菇组织对转化率的影响 | 第41页 |
| ·侵染菌液的浓度对转化率的影响 | 第41页 |
| ·侵染时间对转化率的影响 | 第41页 |
| ·共培养时间对转化率的影响 | 第41页 |
| ·AS 浓度对转化率的影响 | 第41-42页 |
| ·转化效率评价指标 | 第42页 |
| ·转基因香菇的验证 | 第42-43页 |
| ·香菇基因组DNA 的提取（CTAB 法） | 第42-43页 |
| ·抗性转化子的PCR 验证 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-48页 |
| ·香菇潮霉素抗性试验 | 第43-44页 |
| ·头孢噻肟钠对香菇菌丝的毒性试验 | 第44页 |
| ·农杆菌转化子的验证 | 第44-45页 |
| ·香菇农杆菌转化体系的探索 | 第45-47页 |
| ·不同农杆菌菌株对转化率的影响 | 第45-46页 |
| ·侵染菌液浓度对转化率的影响 | 第46页 |
| ·侵染时间对转化率的影响 | 第46-47页 |
| ·共培养时间对转化率的影响 | 第47页 |
| ·AS 浓度对转化率的影响 | 第47页 |
| ·pBHg 香菇转化子的验证 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| ·香菇潮霉素抗性试验 | 第48页 |
| ·头孢噻肟钠对香菇菌丝的毒性试验 | 第48-49页 |
| ·香菇农杆菌转化体系的探索 | 第49-50页 |
| ·不同农杆菌菌株对转化率的影响 | 第49页 |
| ·不同香菇组织对转化率的影响 | 第49页 |
| ·侵染菌液浓度对转化率的影响 | 第49页 |
| ·侵染时间对转化率的影响 | 第49-50页 |
| ·共培养时间对转化率的影响 | 第50页 |
| ·AS 浓度对转化率的影响 | 第50页 |
| ·pBHg 香菇转化子的验证 | 第50-51页 |
| 第四章 BCA 基因转入香菇的研究 | 第51-58页 |
| 1 试验材料 | 第51-52页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第51页 |
| ·常用溶液 | 第51页 |
| ·培养基 | 第51-52页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第52页 |
| 2 试验方法 | 第52-54页 |
| ·质粒转化农杆菌 | 第52-53页 |
| ·转化步骤 | 第52页 |
| ·阳性转化子的验证 | 第52-53页 |
| ·农杆菌转化香菇试验 | 第53页 |
| ·香菇转化子的验证 | 第53-54页 |
| ·香菇基因组DNA 的提取 | 第53-54页 |
| ·香菇转化子的PCR 验证 | 第54页 |
| ·香菇转化子的测序验证 | 第54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-57页 |
| ·质粒转化农杆菌 | 第54-55页 |
| ·农杆菌转化香菇试验 | 第55-56页 |
| ·香菇转化子的验证 | 第56-57页 |
| ·香菇转化子的PCR 验证 | 第56-57页 |
| ·香菇转化子的测序验证 | 第57页 |
| 4 讨论 | 第57-58页 |
| 第五章 总结与展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |