| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 硒的研究进展 | 第12-14页 |
| ·硒的生物学功能 | 第12-13页 |
| ·抗氧化功能 | 第12页 |
| ·促进免疫 | 第12页 |
| ·调控基因表达 | 第12-13页 |
| ·促进基础代谢 | 第13页 |
| ·对动物繁殖性能的影响 | 第13页 |
| ·减弱微量元素毒性 | 第13页 |
| ·植物硒积累的分子机制 | 第13-14页 |
| 2. 萝卜硫素的研究进展 | 第14-18页 |
| ·萝卜硫素的来源和代谢 | 第14-15页 |
| ·萝卜硫素脱毒和抗氧化功能的机制 | 第15-16页 |
| ·萝卜硫素的生物学功能 | 第16-18页 |
| ·防癌作用 | 第16页 |
| ·拮抗有害元素 | 第16页 |
| ·抗氧化功能 | 第16-18页 |
| 3. 硒甲基转移酶的研究进展 | 第18-20页 |
| 4 实时荧光定量PCR 技术及其应用 | 第20-22页 |
| ·实时荧光定量PCR 技术基本原理 | 第20-21页 |
| ·实时荧光定量的常用方法 | 第21-22页 |
| ·实时荧光定量PCR 技术的应用现状 | 第22页 |
| 5. 本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 青花菜硒甲基转移酶基因的克隆 | 第24-37页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·质粒和菌种 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-31页 |
| ·总RNA 的提取和检测 | 第24-26页 |
| ·准备工作 | 第24-25页 |
| ·RNA 抽提 | 第25页 |
| ·RNA 质量检测 | 第25-26页 |
| ·第一链cDNA 的合成 | 第26-27页 |
| ·目的基因保守区域的PCR | 第27-28页 |
| ·目的片段的回收 | 第28-29页 |
| ·回收目的片段的连接 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第30页 |
| ·连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第30页 |
| ·PCR 鉴定目的基因及测序 | 第30-31页 |
| ·3′-RACE 获得目的基因的3′端 | 第31-33页 |
| ·第一链cDNA 的获得 | 第31-32页 |
| ·3′-RACE 的PCR | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-37页 |
| ·RNA 抽提 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR | 第34-35页 |
| ·3′-RACE PCR 扩增 | 第35-37页 |
| 第三章 青花菜SMT 基因超表达和RNA 干扰载体的构建 | 第37-54页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·质粒和菌种 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·培养基配制 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA 的提取 | 第38-39页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404 感受态的制备 | 第39页 |
| ·冻融法介导的质粒转化根癌农杆菌 | 第39页 |
| ·超表达载体的构建 | 第39-43页 |
| ·目的基因编码序列（ORF）的扩增 | 第39-40页 |
| ·pBI121 质粒的双酶切及载体大片段的回收纯化 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pMD18-T-SMT 的双酶切及目的基因ORF 片段的回收纯化 | 第41页 |
| ·目的基因与pBI121 载体大片段的连接 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pBI121-SMT 的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·RNA 干扰载体的构建 | 第43-47页 |
| ·目的基因的获得 | 第43-44页 |
| ·克隆载体的构建 | 第44-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-54页 |
| ·超表达载体的酶切验证与PCR 检测 | 第47-50页 |
| ·编码序列的扩增 | 第47-49页 |
| ·超表达载体的酶切验证 | 第49-50页 |
| ·RNA 干扰载体的酶切验证与PCR 检测 | 第50-54页 |
| ·基因片段SP 的PCR 扩增 | 第50-52页 |
| ·克隆载体的酶切验证 | 第52页 |
| ·PCR 检测RNA 干扰结构元件的完整性 | 第52-53页 |
| ·植物表达载体的酶切验证 | 第53-54页 |
| 第四章 青花菜SMT 基因超表达遗传转化 | 第54-63页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·植物材料 | 第54页 |
| ·菌种 | 第54页 |
| ·培养基配制 | 第54-55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-58页 |
| ·青花菜遗传转化体系 | 第55页 |
| ·无菌苗的获得 | 第55页 |
| ·芽诱导和生根培养 | 第55页 |
| ·转基因植株的分子生物学鉴定 | 第55-58页 |
| ·转基因植株的基因组DNA 提取 | 第55-56页 |
| ·转基因植株SMT 基因的PCR 检测 | 第56-57页 |
| ·转基因植株SMT 基因的荧光定量PCR 分析 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-63页 |
| ·转基因植株的获得 | 第58-59页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第59-63页 |
| ·转基因植株的基因组DNA 提取 | 第59-60页 |
| ·转基因植株SMT 基因的PCR 检测 | 第60-61页 |
| ·转基因植株实时荧光定量PCR 分析 | 第61-63页 |
| 第五章 讨论 | 第63-65页 |
| ·硒甲基转移酶基因 | 第63页 |
| ·超表达和RNA 干扰 | 第63-64页 |
| ·需继续开展的研究 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
