| 论文创新点 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 研究意义 | 第16-17页 |
| 研究路线 | 第17-18页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-41页 |
| 第一章 传染性法氏囊病(IBD) | 第18-25页 |
| 定义 | 第18-19页 |
| 简史 | 第19页 |
| 流行病学 | 第19页 |
| 抗原性及毒力变异 | 第19-21页 |
| 发病机理和临床症状 | 第21-23页 |
| 传染性法氏囊病的诊断 | 第23页 |
| 预防和控制 | 第23-25页 |
| 第二章 传染性法氏囊病病毒(IBDV) | 第25-34页 |
| 分类 | 第25-26页 |
| 病毒结构和基因组结构 | 第26-27页 |
| 理化性质 | 第27页 |
| 病毒蛋白 | 第27-30页 |
| IBDV的复制 | 第30-34页 |
| 第三章 传染性法氏囊病病毒宿主转录组学研究进展 | 第34-41页 |
| Long-SAGE技术在IBDV宿主转录组学研究上的应用 | 第35-37页 |
| 基因芯片技术在IBDV宿主转录组学研究上的应用 | 第37-40页 |
| 其他病原宿主转录组研究进展 | 第40-41页 |
| 第二部分 研究内容 | 第41-137页 |
| 第一章 IBDV对宿主基因表达的影响 | 第41-88页 |
| 摘要 | 第41-43页 |
| 1 材料与方法 | 第43-50页 |
| ·Long-SAGE文库 | 第43页 |
| ·单克隆Vero细胞系的培养和总RNA的分离 | 第43-44页 |
| ·鸡胚成纤维细胞培养、接毒和总RNA提取 | 第44页 |
| ·动物感染试验和法氏囊总RNA提取 | 第44-45页 |
| ·Real-time PCR引物设计 | 第45-50页 |
| ·荧光定量PCR程序 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-71页 |
| ·Long-SAGE文库数据登录 | 第50-51页 |
| ·Long-SAGE文库中表达变化基因汇总 | 第51-61页 |
| ·差异表达基因聚类 | 第61-63页 |
| ·荧光定量PCR验证 | 第63-68页 |
| ·IBDV感染对鸡胚成纤维细胞中基因表达的影响 | 第68页 |
| ·IBDV感染对法氏囊组织中基因表达的影响 | 第68-69页 |
| ·IBDV感染Vero、CEF和BF的基因表达变化比较 | 第69页 |
| ·炎性因子在IBDV感染的CEF细胞中的表达变化 | 第69-70页 |
| ·炎性因子在IBDV感染法氏囊组织中的表达变化 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-88页 |
| ·IBDV对细胞骨架的影响 | 第71-72页 |
| ·免疫相关基因的表达变化 | 第72-73页 |
| ·mRNA转录及加工相关基因的表达变化 | 第73-74页 |
| ·能量代谢相关基因的表达变化 | 第74-75页 |
| ·蛋白质合成相关基因的表达变化 | 第75-76页 |
| ·细胞增殖相关基因的表达变化 | 第76页 |
| ·表达IBDV VP243蛋白Vero细胞的基因表达变化 | 第76-77页 |
| ·表达IBDV VP5蛋白Vero细胞的基因表达变化 | 第77页 |
| ·IBDV感染Vero、CEF和BF的基因表达变化比较 | 第77-78页 |
| ·促炎性细胞因子对IBDV致病性的作用 | 第78-88页 |
| 第二章 IBDV感染条件下Cofilin基因的表达变化 | 第88-99页 |
| 摘要 | 第88-89页 |
| 1 材料与方法 | 第89-92页 |
| ·细胞、病毒和试剂 | 第89页 |
| ·CEF细胞的制备与接毒 | 第89页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA) | 第89-90页 |
| ·Western-blotting鉴定 | 第90页 |
| ·合成ADF和Cofilin C端13个氨基酸多肽 | 第90-91页 |
| ·多肽偶联 | 第91页 |
| ·小鼠免疫 | 第91页 |
| ·细胞融合 | 第91-92页 |
| ·杂交瘤细胞筛选 | 第92页 |
| ·有限稀释法对阳性孔细胞进行克隆化 | 第92页 |
| ·以腹水的形式大量制备单克隆抗体 | 第92页 |
| 2 结果 | 第92-97页 |
| ·兔抗Cofilin多抗与Vero细胞和CEF细胞的反应性 | 第92-93页 |
| ·Cofilin三维结构预测 | 第93页 |
| ·Cofilin多抗与Cofilin和ADF的反应性分析 | 第93-94页 |
| ·ADF和Cofilin单克隆抗体的制备 | 第94-95页 |
| ·IBDV感染CEF的VP3和cofilin蛋白检测 | 第95页 |
| ·IFA检测IBDV攻毒后肌肉组织和法氏囊组织中的VP3和Cofilin蛋白 | 第95-97页 |
| 3 讨论 | 第97-99页 |
| 第三章 传染性法氏囊病病毒VP4、VP3蛋白单克隆及多克隆抗体的制备 | 第99-119页 |
| 摘要 | 第99-100页 |
| 1 材料与方法 | 第100-110页 |
| ·毒株、载体及主要试剂 | 第100页 |
| ·传染性法氏囊病病毒VP4、VP3基因的克隆 | 第100-101页 |
| ·原核表达载体和真核表达载体的构建 | 第101页 |
| ·连接反应 | 第101-102页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第102页 |
| ·转化 | 第102页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第102-103页 |
| ·原核表达IBDV VP4、VP3蛋白与鉴定 | 第103-105页 |
| ·重组IBDV VP4、VP3蛋白的纯化 | 第105页 |
| ·转染级高纯度真核表达质粒的制备 | 第105-106页 |
| ·细胞转染与VP4、VP3的真核表达 | 第106页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA) | 第106-107页 |
| ·抗IBDV VP3、VP4蛋白单克隆抗体制备 | 第107-109页 |
| ·CEF细胞制备与接毒 | 第109页 |
| ·兔、鸡抗IBDV VP3、VP4多克隆抗体制备 | 第109-110页 |
| 2 结果 | 第110-117页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第110页 |
| ·IBDV VP3、VP4基因原核表达载体的构建 | 第110页 |
| ·VP3、VP4蛋白在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第110-111页 |
| ·传染性法氏囊病病毒VP3、VP4蛋白的表达优化与纯化 | 第111-112页 |
| ·IBDV VP3、VP4基因真核表达载体的构建 | 第112-113页 |
| ·IBDV VP3、VP4基因在Vero细胞中的表达 | 第113-114页 |
| ·抗IBDV VP4、VP3蛋白单克隆抗体的制备 | 第114页 |
| ·间接免疫荧光检测单克隆抗体的反应性 | 第114-116页 |
| ·Western blot检测单克隆抗体的反应性 | 第116页 |
| ·兔、鸡抗IBDV VP3、VP4多克隆抗体的制备 | 第116-117页 |
| 3 讨论 | 第117-119页 |
| 第四章 不同毒力IBDV感染条件下鸡对VP4、VP3蛋白的免疫应答能力 | 第119-137页 |
| 摘要 | 第119-120页 |
| 1 材料与方法 | 第120-123页 |
| ·仪器与试剂 | 第120页 |
| ·动物感染试验 | 第120-121页 |
| ·VP3、VP4蛋白ELISA包被浓度的优化 | 第121-122页 |
| ·间接ELISA检测鸡血清中抗VP3、VP4抗体 | 第122页 |
| ·CEF细胞的制备与接毒 | 第122页 |
| ·中和试验 | 第122-123页 |
| 2 结果 | 第123-133页 |
| ·攻毒后临床症状 | 第123页 |
| ·强弱毒感染血清中抗VP3、VP4抗体的IFA检测结果 | 第123-124页 |
| ·Western blot检测IBDV感染血清中的VP4蛋白特异性抗体 | 第124-125页 |
| ·ELISA检测方法中VP3、VP4蛋白包被量的优化 | 第125-126页 |
| ·IBDV NB株强毒感染血清抗体ELISA监测结果 | 第126-127页 |
| ·IBDV NB株强毒感染血清VP4抗体ELISA监测结果 | 第127页 |
| ·IBDV NB株强毒感染血清VP3抗体监测结果 | 第127-128页 |
| ·IBDV NB株强毒攻毒鸡血清中和抗体与其他抗体的比较 | 第128-129页 |
| ·VP3、VP4 ELISA抗体与病毒中和抗体的统计学关系 | 第129页 |
| ·不同毒力IBDV毒株感染条件下鸡对VP蛋白的免疫应答 | 第129-130页 |
| ·不同毒力IBDV感染后的VP4抗体效价 | 第130-132页 |
| ·IBDV VP4、VP3蛋白在法氏囊组织中的表达分析 | 第132-133页 |
| 3 讨论 | 第133-137页 |
| 全文总结 | 第137-138页 |
| 参考文献 | 第138-147页 |
| 第三部分 附录 | 第147-161页 |
| 缩写词索引 | 第147-149页 |
| 本研究所涉及基因的主要功能 | 第149-153页 |
| 常用试剂及仪器 | 第153-155页 |
| 常用缓冲液及培养基配方 | 第155-161页 |
| 致谢 | 第161页 |
