| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-44页 |
| 1 dsRNA病毒简介 | 第14-19页 |
| ·dsRNA病毒的概念 | 第14-15页 |
| ·dsRNA病毒中重要代表病毒简介 | 第15-19页 |
| 2 反向遗传学研究 | 第19-39页 |
| ·病毒学研究方法发展简史 | 第19-20页 |
| ·RNA病毒反向遗传学的概念 | 第20-21页 |
| ·RNA病毒反向遗传学一般操作方法 | 第21页 |
| ·RNA病毒反向遗传系统发展简史 | 第21-22页 |
| ·正、负链RNA病毒反向遗传系统 | 第22-28页 |
| ·dsRNA病毒反向遗传系统 | 第28-37页 |
| ·反向遗传学的应用 | 第37-38页 |
| ·病毒拯救效率的影响因素 | 第38-39页 |
| 3 本课题的研究目的及意义 | 第39-40页 |
| 4 研究内容及技术路线 | 第40-44页 |
| 第二章 传染性法氏囊病病毒(ZJ2000株)基因组B节段全长的克隆及ZJ2000和TL2004株生物学实验 | 第44-62页 |
| 摘要 | 第44页 |
| 1 引言 | 第44-45页 |
| 2 材料与方法 | 第45-53页 |
| ·病毒毒株及鸡胚 | 第45页 |
| ·载体、菌株及分子生物学试剂 | 第45页 |
| ·ZJ2000株病毒基因组dsRNA的提取 | 第45-47页 |
| ·长距离RT-PCR一步法扩增基因组B节段全长 | 第47-48页 |
| ·cDNA克隆、鉴定及序列测定 | 第48-51页 |
| ·IBDV ZJ2000株体外生物学实验 | 第51-53页 |
| ·IBDV TL2004株体内、体外生物学实验 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-59页 |
| ·IBDV ZJ2000株基因组B节段cDNA的克隆、鉴定及序列测定 | 第53-55页 |
| ·ZJ2000株的体外生物学实验 | 第55-56页 |
| ·IBDV TL2004株体外、体外生物学实验 | 第56-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 第三章 双RNA病毒科基因组生物信息学分析 | 第62-82页 |
| 摘要 | 第62页 |
| 1 引言 | 第62页 |
| 2 所用生物信息学软件 | 第62页 |
| 3 序列分析 | 第62-67页 |
| ·A节段分析 | 第62-64页 |
| ·B节段分析 | 第64-67页 |
| 4 IBDV毒力变异的分子基础及进化特征 | 第67-73页 |
| ·ZJ2000株是一个新出现的基因组重配毒株 | 第67-69页 |
| ·影响ZJ2000株的毒力因素 | 第69-70页 |
| ·自然界中基因组重配发生的机理及概率 | 第70-73页 |
| 5 水生动物双RNA病毒基因组重配分析 | 第73-80页 |
| 6 基因组重配现象在RNA病毒进化中的作用分析 | 第80-81页 |
| 7 小结 | 第81-82页 |
| 第四章 基于RNA聚合酶Ⅱ的双质粒共转染传染性法氏囊病病毒反向遗传系统的建立 | 第82-98页 |
| 摘要 | 第82页 |
| 1 引言 | 第82页 |
| 2 材料与方法 | 第82-93页 |
| ·载体、菌株及分子生物学试剂 | 第82-83页 |
| ·预构建的PCI-ma和PCI-mb载体结构图及所用引物 | 第83页 |
| ·重叠PCR法在IBDV基因组A、B节段分别引入核酶序列 | 第83-89页 |
| ·感染性真核表达载体的构建 | 第89-90页 |
| ·病毒拯救 | 第90-92页 |
| ·病毒检测 | 第92-93页 |
| 3 结果 | 第93-96页 |
| ·重叠PCR法扩增基因组A、B节段全长 | 第93页 |
| ·感染性真核表达载体的PCR及酶切鉴定结果 | 第93-94页 |
| ·感染性真核表达载体的测序结果 | 第94-95页 |
| ·病毒拯救 | 第95-96页 |
| 4 讨论 | 第96-98页 |
| 第五章 串连式IBDV病毒反向遗传系统的建立 | 第98-120页 |
| 摘要 | 第98页 |
| 1 引言 | 第98-99页 |
| 2 材料与方法 | 第99-109页 |
| ·载体、菌株及分子生物学试剂 | 第99页 |
| ·串联式报告基因载体pDsCMV-R-G的构建及表达 | 第99-103页 |
| ·串连式IBDV病毒遗传拯救 | 第103-109页 |
| 3 结果 | 第109-115页 |
| ·pCMV-G载体的构建与鉴定 | 第109页 |
| ·pDsCMV-R-G载体的构建与鉴定 | 第109-110页 |
| ·pDsCMV-R-G在细胞内的表达 | 第110-111页 |
| ·PCR法扩增PCI-mblined | 第111-112页 |
| ·过渡载体PCI-mmb的鉴定 | 第112-113页 |
| ·感染性真核表达载体pDsCMV-A-B的鉴定 | 第113页 |
| ·病毒拯救及拯救效率比较 | 第113-115页 |
| 4 讨论 | 第115-120页 |
| 第六章 基于辅助病毒表达T7 RNA聚合酶的传染性法氏囊病病毒反向遗传系统的建立 | 第120-136页 |
| 摘要 | 第120页 |
| 1 引言 | 第120-121页 |
| 2 材料和方法 | 第121-128页 |
| ·载体、菌株及分子生物学试剂 | 第121页 |
| ·预构建PT-R报告基因载体图谱及引物设计 | 第121-122页 |
| ·T7启动子控制的红色荧光报告基因载体的构建 | 第122-124页 |
| ·痘病毒vTF7-3在Vero细胞内表达T7 RNA聚合酶活性的检测 | 第124页 |
| ·T7启动子控制的IBDV感染性载体的构建 | 第124-127页 |
| ·病毒拯救 | 第127-128页 |
| ·病毒检测 | 第128页 |
| 3 结果 | 第128-133页 |
| ·PT-R报告基因载体的构建 | 第128-129页 |
| ·PT-R在Vero细胞内表达情况检测 | 第129-130页 |
| ·IBDV基因组5'末端和3'末端引入T7启动子和HDV序列 | 第130-131页 |
| ·感染性载体的构建 | 第131-132页 |
| ·病毒拯救 | 第132-133页 |
| 4 讨论 | 第133-136页 |
| 第七章 T7 RNA聚合酶基因的克隆、稳定表达T7 RNA聚合酶细胞系的建立及IBDV的遗传拯救 | 第136-156页 |
| 摘要 | 第136页 |
| 1 引言 | 第136-137页 |
| 2 材料与方法 | 第137-144页 |
| ·载体、菌株及分子生物学试剂 | 第137页 |
| ·T7 RNA聚合酶基因的克隆 | 第137-139页 |
| ·T7 RNA聚合酶基因的序列分析 | 第139页 |
| ·T7 RNA聚合酶基因逆转录病毒载体的构建 | 第139-141页 |
| ·感染性逆转录病毒颗粒的获取 | 第141-142页 |
| ·表达T7 RNA聚合酶Vero细胞抗性克隆的筛杀 | 第142-144页 |
| ·基于V-T7细胞系的IBDV拯救 | 第144页 |
| ·病毒拯救效率比较 | 第144页 |
| 3 结果 | 第144-151页 |
| ·T7 RNA聚合酶基因的克隆及其序列分析 | 第144-146页 |
| ·T7 RNA聚合酶基因逆转录病毒表达载体的构建 | 第146-147页 |
| ·稳定表达T7 RNA聚合酶V-T7细胞系的筛选 | 第147-148页 |
| ·稳定表达T7 RNA聚合酶细胞系的鉴定 | 第148-150页 |
| ·病毒拯救及拯救效率比较 | 第150-151页 |
| 4 讨论 | 第151-156页 |
| 第八章 总结与展望 | 第156-160页 |
| 1. 研究论文主要结论及创新点 | 第156-157页 |
| 2 研究展望 | 第157-160页 |
| 参考文献 | 第160-172页 |
| 附录 | 第172-192页 |
| 附录图1 | 第172-178页 |
| 附录图2 | 第178-188页 |
| 附录图3 | 第188-192页 |
| 作者简历 | 第192页 |
| 在读期间所获荣誉及奖励 | 第192-193页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第193-195页 |
| 参加国际会议 | 第195页 |
| 申请国家发明专利 | 第195页 |
| 攻读博士学位期间参加的科研项目 | 第195页 |
