| 目录 | 第1-10页 |
| 课题来源 | 第10-11页 |
| 论文创新点 | 第11-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 研究意义 | 第17-18页 |
| 技术路线 | 第18-19页 |
| 第一部分 文献综述 | 第19-40页 |
| 第一章 猪圆环病毒2型研究进展 | 第19-29页 |
| 1 历史背景 | 第19-20页 |
| 2 PCV分类 | 第20-21页 |
| 3 PCV2的基因组结构及其编码蛋白 | 第21-23页 |
| ·Rep蛋白 | 第21-22页 |
| ·Cap蛋白 | 第22-23页 |
| ·ORF3蛋白 | 第23页 |
| 4 PCV2致病机制 | 第23-29页 |
| ·病毒因素 | 第24-25页 |
| ·同时感染对病毒致病性的影响 | 第25-26页 |
| ·免疫系统因素对病毒致病性的影响 | 第26-29页 |
| ·免疫刺激作用对病毒致病性的影响 | 第27页 |
| ·免疫抑制作用对病毒致病性的影响 | 第27-29页 |
| 第二章 2-DE/MS分析差异蛋白质组方法 | 第29-40页 |
| 1 蛋白质组学简介 | 第29页 |
| 2 二维凝胶电泳结合质谱分析的蛋白质组学研究 | 第29-30页 |
| 3 二维凝胶电泳分离技术 | 第30-33页 |
| ·二维凝胶电泳的样品准备 | 第30-31页 |
| ·固定化蛋白质IPG-strip技术 | 第31页 |
| ·二维凝胶电泳胶和印记的染色 | 第31-32页 |
| ·蛋白质需要的量 | 第32页 |
| ·胶的扫描 | 第32页 |
| ·数据检索 | 第32-33页 |
| 4 常用的蛋白质的质谱鉴定方法 | 第33-35页 |
| ·MS | 第33-34页 |
| ·MALDI-MS | 第34页 |
| ·ESI-MS | 第34-35页 |
| ·FTICR-MS | 第35页 |
| 5 2-DE/MS在病原研究中的应用 | 第35-40页 |
| ·2-DE/MS在细菌中的应用 | 第35-36页 |
| ·2-DE/MS在寄生虫中的应用 | 第36-37页 |
| ·2-DE/MS在病毒中的应用 | 第37-40页 |
| 第二部分 研究内容 | 第40-118页 |
| 第一章 PCV2感染性克隆构建 | 第40-57页 |
| 摘要 | 第40-41页 |
| 1 材料与方法 | 第41-50页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·病毒,细胞和质粒 | 第41页 |
| ·酶与试剂 | 第41-42页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-50页 |
| ·细胞培养PCV2病毒 | 第42页 |
| ·病毒DNA提取 | 第42-43页 |
| ·构建感染性克隆DNA | 第43-47页 |
| ·拯救病毒rTZ | 第47-48页 |
| ·检测拯救的病毒粒子 | 第48-49页 |
| ·病毒粒子TCID_(50)测定 | 第49-50页 |
| 2 结果 | 第50-55页 |
| ·TZ全长DNA克隆 | 第50页 |
| ·pSK-TZ的酶切鉴定结果 | 第50-51页 |
| ·序列测定结果 | 第51页 |
| ·PCV2 rTZ病毒拯救结果 | 第51-54页 |
| ·IFA检测结果 | 第51-52页 |
| ·IPMA检测结果 | 第52-53页 |
| ·Western Blot检测结果 | 第53-54页 |
| ·PCV2 rTZ在体外扩增能力与TZ的比较 | 第54-55页 |
| ·病毒粒子的传代及其TCID_(50)测定 | 第54页 |
| ·PCV2 rTZ在体外扩增能力 | 第54-55页 |
| 3 讨论 | 第55-56页 |
| 4 小结 | 第56-57页 |
| 第二章 二维电泳-质谱分析PCV2感染PK-15差异表达蛋白 | 第57-98页 |
| 摘要 | 第57-59页 |
| 1 材料与方法 | 第59-70页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·病毒、细胞和抗体 | 第59页 |
| ·酶与试剂 | 第59-60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-70页 |
| ·细胞培养,病毒感染和蛋白样品制备 | 第60-61页 |
| ·蛋白定量 | 第61页 |
| ·二维凝胶电泳和图像分析 | 第61-65页 |
| ·扫描观察结果以及统计分析 | 第65-66页 |
| ·应用MALDI-TOF/TOF质谱方法鉴定变化的点以及数据库搜索 | 第66-68页 |
| ·荧光定量反转录PCR(Real time RT-PCR) | 第68-69页 |
| ·Western Blot | 第69-70页 |
| 2 结果 | 第70-92页 |
| ·蛋白制备与检测 | 第70-71页 |
| ·蛋白定量结果 | 第71页 |
| ·PCV2感染PK-15细胞的二维凝胶电泳结果 | 第71-73页 |
| ·PDQuest软件检测蛋白点 | 第73页 |
| ·差异表达蛋白分析结果 | 第73-78页 |
| ·质谱鉴定差异表达蛋白 | 第78-87页 |
| ·差异表达蛋白的分类 | 第87-89页 |
| ·功能分类 | 第87-88页 |
| ·亚细胞分类 | 第88-89页 |
| ·部分差异表达蛋白的转录本分析 | 第89-90页 |
| ·Western blot分析 | 第90-92页 |
| 3 讨论 | 第92-97页 |
| 4 小结 | 第97-98页 |
| 第三章 PCV2衣壳蛋白与PK-15细胞蛋白α-tubulin相互作用的鉴定 | 第98-118页 |
| 摘要 | 第98-99页 |
| 1 材料与方法 | 第99-104页 |
| ·材料 | 第99-100页 |
| ·病毒与细胞 | 第99页 |
| ·质粒与抗体 | 第99-100页 |
| ·酶与试剂 | 第100页 |
| ·方法 | 第100-104页 |
| ·细胞培养与病毒感染 | 第100页 |
| ·PCV2 rTZ基因组DNA提取 | 第100页 |
| ·构建PCV2 Rep、Cap基因真核表达载体 | 第100-101页 |
| ·PK-15细胞转染 | 第101-102页 |
| ·间接免疫荧光(双免疫荧光) | 第102-103页 |
| ·细胞核染色 | 第103页 |
| ·免疫共沉淀 | 第103-104页 |
| ·Western Blot | 第104页 |
| 2 结果 | 第104-114页 |
| ·PCR扩增结果 | 第104-106页 |
| ·Rep基因扩增结果 | 第104-105页 |
| ·Cap基因扩增结果 | 第105-106页 |
| ·PCV2 Rep、Cap真核表达载体构建结果 | 第106-107页 |
| ·PCV2 Rep真核表达载体构建结果 | 第106页 |
| ·PCV2 Cap真核表达载体构建结果 | 第106-107页 |
| ·序列测定与比较 | 第107页 |
| ·PCV2 Rep、Cap蛋白在PK-15细胞中亚细胞定位 | 第107-110页 |
| ·PCV2 Rep蛋白在PK-15细胞中亚细胞定位 | 第107-109页 |
| ·PCV2 Cap蛋白在PK-15细胞中亚细胞定位 | 第109-110页 |
| ·在PCV2感染的PK-15细胞中细胞骨架与PCV2病毒粒子共定位关系 | 第110-112页 |
| ·PCV2 Rep、Cap蛋白与α-tubulin共定位结果 | 第112-113页 |
| ·免疫共沉淀结果 | 第113-114页 |
| 3 讨论 | 第114-116页 |
| 4 小结 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-141页 |
| 附录A 常用缓冲液及配方 | 第141-148页 |
| 附录B 全文缩略语 | 第148-149页 |
| 附录C 攻博期间发表或待发表的学术论文 | 第149-150页 |
| 致谢 | 第150页 |
