| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-26页 |
| ·丝状真菌原生质体制备遗传转化研究进展 | 第12-19页 |
| ·原生质体的制备的影响因素 | 第12-15页 |
| ·菌丝体的菌龄 | 第12页 |
| ·预处理方式 | 第12-13页 |
| ·裂解酶浓度 | 第13页 |
| ·培养基成分 | 第13页 |
| ·裂解酶的种类 | 第13页 |
| ·裂解时间 | 第13-14页 |
| ·裂解温度 | 第14页 |
| ·酶液及稳渗剂pH值 | 第14页 |
| ·稳渗剂类型 | 第14页 |
| ·其他影响因素 | 第14-15页 |
| ·影响原生质体再生的因素 | 第15页 |
| ·丝状真菌的原生质体转化方法 | 第15-18页 |
| ·电击转化法(Electroporation) | 第15页 |
| ·PEG介导转化法 | 第15-16页 |
| ·醋酸锂(Lithium Acetate)转化法 | 第16页 |
| ·根癌农杆菌介导的转化(Agrobacterium tumefaciens MediatedTransformation) | 第16-17页 |
| ·基因枪转化法(Biolistics) | 第17页 |
| ·限制性内切酶介导转化法(Restriction Enzyme Mediated Integration) | 第17页 |
| ·脂质体转化法 | 第17-18页 |
| ·丝状真菌遗传转化系统的选择标记 | 第18-19页 |
| ·抗药物性标记 | 第18页 |
| ·功能标记 | 第18页 |
| ·营养缺陷型标记 | 第18-19页 |
| ·病原菌致病相关基因的研究 | 第19-26页 |
| ·MAPK途径的研究 | 第19-22页 |
| ·丝氨酸蛋白酶的研究 | 第22-26页 |
| 第二章 甘蔗梢腐病菌原生质体制备及遗传转化体系建立 | 第26-37页 |
| ·材料与方法 | 第26-27页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-35页 |
| ·溶壁酶酶浓度对原生质体制备的影响 | 第27-28页 |
| ·不同酶对原生质体裂解的影响 | 第28页 |
| ·离心力及液体高度对原生质体活性的影响 | 第28-29页 |
| ·不同高度的液体对沉淀的松紧度的影响 | 第29-30页 |
| ·同样高度的液体、不同管径离心管对沉淀松紧度的影响 | 第30-31页 |
| ·不同复苏时间对原生质体再生的影响 | 第31页 |
| ·如何避免将原生质体离心于管壁上 | 第31-33页 |
| ·不同减速档对于沉淀松紧度影响 | 第33页 |
| ·不同稳渗剂对于原生质体沉淀的影响 | 第33-34页 |
| ·甘蔗梢腐病菌的潮霉素最佳抑制浓度的筛选 | 第34-35页 |
| ·离心机的平衡方法 | 第35页 |
| ·结论与讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 随机插入突变体的插入位点侧翼序列扩增的探索及发现 | 第37-55页 |
| ·试验使用的菌株、质粒、试剂和培养基等材料 | 第37页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·实验方案 | 第38-43页 |
| ·镰刀菌基因组DNA的提取 | 第38页 |
| ·DNA琼脂糖电泳 | 第38-39页 |
| ·几种扩增侧翼的方法 | 第39-43页 |
| ·测序 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-52页 |
| ·对扩增插入片段侧翼序列的一些探索 | 第43-45页 |
| ·侧翼序列扩增结果 | 第45-47页 |
| ·对扩增已知片段的侧翼序列的方法的探讨 | 第47-52页 |
| ·结论与讨论 | 第52-55页 |
| 第四章 假定致病相关的基因的功能研究 | 第55-74页 |
| ·材料与方法 | 第55-59页 |
| ·原生质体制备与转化,DNA提取、PCR反应 | 第55页 |
| ·Southern blot | 第55-58页 |
| ·FN28目的片段的扩增 | 第58页 |
| ·基于同源重组的基因敲除原理 | 第58页 |
| ·基因过表达突变体的获得 | 第58-59页 |
| ·盐胁迫测定 | 第59页 |
| ·致病性测定 | 第59页 |
| ·结果与分析 | 第59-73页 |
| ·目的片段的扩增 | 第59-60页 |
| ·串珠镰孢MAPK信号级联相关基因功能分析 | 第60-70页 |
| ·FVEG_03043.3 | 第63-65页 |
| ·FVEG 02618.3 | 第65-68页 |
| ·FVEG_04168.3 | 第68-70页 |
| ·甘蔗梢腐病病原菌丝氨酸蛋白酶的研究 | 第70-73页 |
| ·FVEG00212.3 | 第70-73页 |
| ·结论与讨论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
