| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一部分 前言 | 第13-20页 |
| ·HPV结构与分型 | 第13-14页 |
| ·HPV发病机制探讨 | 第14-15页 |
| ·预防性HPV疫苗的研制 | 第15-16页 |
| ·HPV的载体表达系统 | 第16-17页 |
| ·构建HPV16L1疫苗的思路 | 第17-20页 |
| ·选择合适的表达载体 | 第17-18页 |
| ·密码子优化提高L1蛋白表达量 | 第18-19页 |
| ·本研究总体技术路线 | 第19-20页 |
| 第二部分 材料及方法 | 第20-42页 |
| ·实验材料 | 第20-26页 |
| ·菌株、质粒、细胞及毒种 | 第20页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第20-22页 |
| ·主要试剂的配制 | 第22-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·引物设计及合成 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-42页 |
| ·重组Baculovirus的构建 | 第26-36页 |
| ·重组供体质粒的构建 | 第27-33页 |
| ·质粒pUC18-mod.16L1小量制备 | 第29-30页 |
| ·制备的质粒DNA的电泳检测 | 第30页 |
| ·重组质粒pUC18-mod.16L1和供体质粒pFastBac1的双酶切 | 第30页 |
| ·酶切产物的纯化(琼脂糖凝胶回收法) | 第30-31页 |
| ·连接反应 | 第31页 |
| ·大肠杆菌电转化感受态细胞制备 | 第31-32页 |
| ·重组DNA的转化(电穿孔转化) | 第32页 |
| ·重组供体质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组杆粒的构建与制备 | 第33-35页 |
| ·感受态DH10Bac大肠杆菌的制备 | 第33页 |
| ·电转化DH10Bac大肠杆菌和蓝白斑筛选阳性克隆 | 第33页 |
| ·重组Bacmid DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·重组Bacmid检测与鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组杆状病毒的形成 | 第35-36页 |
| ·重组Bacmid转染Sf9细胞 | 第35页 |
| ·重组杆状病毒的PCR鉴定 | 第35-36页 |
| ·病毒滴度测定 | 第36页 |
| ·P2病毒库的建立 | 第36页 |
| ·重组杆状病毒的感染及L1蛋白在昆虫细胞中的表达 | 第36-40页 |
| ·病毒感染 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE测定表达蛋白 | 第37-38页 |
| ·Western blot鉴定表达蛋白 | 第38-39页 |
| ·ELISA分析表达产物 | 第39-40页 |
| ·重组杆状病毒感染细胞及其产物的镜下观察 | 第40页 |
| ·光镜观察 | 第40页 |
| ·电镜观察 | 第40页 |
| ·优化效果鉴定及表达条件的优化 | 第40-42页 |
| ·密码子优化型HPV16L1基因优化效果鉴定 | 第40-41页 |
| ·HPV16L1蛋白在两种昆虫细胞中表达条件的优化 | 第41-42页 |
| 第三部分 实验结果 | 第42-51页 |
| ·HPV16L1基因密码子优化及基因合成 | 第42页 |
| ·含密码子优化型HPV16L1基因的重组杆状病毒的获得 | 第42-44页 |
| ·重组供体质粒pFastBac1-mod.16L1的构建 | 第42页 |
| ·重组杆粒rBacmid-mod.16L1的获得 | 第42-43页 |
| ·重组杆状病毒rBac-mod.16L1的获得 | 第43-44页 |
| ·重组杆状病毒的扩增 | 第44页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第44-45页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE分析结果 | 第44页 |
| ·Western blot鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·重组杆状病毒感染细胞及其产物的镜下观察 | 第45-49页 |
| ·光镜观察结果 | 第45-46页 |
| ·感染昆虫细胞的电镜观察 | 第46-49页 |
| ·优化效果鉴定及表达条件的优化 | 第49-51页 |
| ·密码子优化型HPV16L1基因优化效果鉴定 | 第49页 |
| ·HPV16L1蛋白在两种昆虫细胞中表达条件的优化选择 | 第49-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 讨论 | 第52-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附录 | 第63-68页 |
| 发表文章目录 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
