| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-14页 |
| 符号与缩略语说明 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-43页 |
| 1 硝基苯酚类化合物的生物降解及代谢过程中双加氧酶的研究 | 第17-25页 |
| ·硝基苯酚类化合物的生物降解现状 | 第17-18页 |
| ·芳香族开环加氧酶 | 第18页 |
| ·开环双加氧酶的微生物资源 | 第18-19页 |
| ·开环双加氧酶的分类 | 第19页 |
| ·开环双加氧酶的底物利用范围 | 第19-22页 |
| ·开环双加氧酶的结构和功能研究 | 第22-25页 |
| 2 蛋白质晶体学简介 | 第25-31页 |
| ·蛋白质的结晶过程 | 第27-28页 |
| ·蛋白质结晶常用沉淀剂 | 第28-29页 |
| ·常用蛋白质结晶方法 | 第29-30页 |
| ·常用蛋白质结晶条件筛选方法 | 第30-31页 |
| 3 蛋白质晶体学在微生物来源污染物降解酶研究上的应用 | 第31-33页 |
| 参考文献 | 第33-43页 |
| 第二章 Pseudomonas putida DLL-E4 1,2,4-苯三酚1,2-双加氧酶(PnpC)的晶体结构 | 第43-85页 |
| 1 材料与方法 | 第44-54页 |
| ·试剂及相关仪器设备 | 第44页 |
| ·菌株和质粒 | 第44-45页 |
| ·抗生素及使用浓度 | 第45页 |
| ·PnpC蛋白质截短表达载体的构建 | 第45-48页 |
| ·PnpC蛋白质的表达、纯化 | 第48-50页 |
| ·结晶前的准备工作 | 第50-52页 |
| ·PnpC蛋白质的结晶条件初筛及优化 | 第52-53页 |
| ·PnpC蛋白质晶体衍射能力检查及衍射数据采集 | 第53页 |
| ·PnpC蛋白质氨基酸序列比对 | 第53页 |
| ·PnpC蛋白质晶体结构解析 | 第53-54页 |
| 2 结果与讨论 | 第54-78页 |
| ·PnpC蛋白质的纯化 | 第54-56页 |
| ·PnpC蛋白质的浓缩及保存 | 第56-57页 |
| ·结晶所用PnpC蛋白质浓度的选择 | 第57页 |
| ·PnpC蛋白质晶体生长以及晶体的初步检查 | 第57-58页 |
| ·PnpC蛋白质的结晶条件及条件优化 | 第58-62页 |
| ·防冻液的选择 | 第62页 |
| ·数据采集及处理 | 第62-65页 |
| ·PnpC蛋白质晶体结构 | 第65-74页 |
| ·PnpC蛋白质截短表达研究 | 第74-76页 |
| ·PnpC蛋白质氨基酸序列比对 | 第76-78页 |
| 本章小结 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 第三章 两个农药降解相关酶的表达纯化、结晶和初步晶体学研究 | 第85-113页 |
| 第一节 对硝基苯酚4-单加氧酶(PnpA)的表达、纯化、结晶及初步晶体学分析 | 第85-96页 |
| 1 材料与方法 | 第86-88页 |
| ·试剂及所用仪器 | 第86页 |
| ·菌株及抗生素 | 第86页 |
| ·PnpA蛋白质的表达以及纯化 | 第86-87页 |
| ·PnpA酶活测定 | 第87页 |
| ·亚硝酸根测定标准曲线的制作 | 第87页 |
| ·PnpA蛋白质结晶条件筛选及优化 | 第87-88页 |
| ·PnpA蛋白质晶体结构数据采集及相位问题解决的尝试 | 第88页 |
| 2 结果与讨论 | 第88-96页 |
| ·亚硝酸根测定的标准曲线 | 第88页 |
| ·PnpA蛋白质的纯化及保存 | 第88-90页 |
| ·结晶条件以及条件优化 | 第90-92页 |
| ·防冻液的选择及晶体的浸泡 | 第92页 |
| ·PnpA蛋白质晶体数据采集情况 | 第92-94页 |
| ·PnpA蛋白质晶体结构解析尝试 | 第94-96页 |
| 第二节 阿特拉津脱氯酶AtzA的表达纯化、结晶和初步晶体学研究 | 第96-110页 |
| 1 材料与方法 | 第97-100页 |
| ·试剂及所用小型仪器 | 第97页 |
| ·菌株与质粒 | 第97页 |
| ·抗生素及使用浓度 | 第97-98页 |
| ·阿特拉津降解菌Pseudomonas sp.SA1基因组DNA的提取 | 第98页 |
| ·表达载体pET-atzA构建 | 第98-99页 |
| ·AtzA蛋白质表达及纯化 | 第99页 |
| ·AtzA的酶活测定方法 | 第99-100页 |
| 2 结果与讨论 | 第100-110页 |
| ·表达载体pET-atzA的构建 | 第100-102页 |
| ·AtzA蛋白质的纯化及保存 | 第102-104页 |
| ·AtzA蛋白质结晶条件及优化 | 第104-110页 |
| 本章小结 | 第110页 |
| 参考文献 | 第110-113页 |
| 全文总结 | 第113-115页 |
| 创新点 | 第115-117页 |
| 附录一 文中所用的试剂、培养基及相关缓冲体系配方 | 第117-120页 |
| 附录二 文中所用蛋白质的氨基酸序列 | 第120-121页 |
| 发表论文及会议摘要 | 第121-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
